[發明專利]一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條

在審

• 申請號: 201910329451.2
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN110045115A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 郭業民;劉曉晗;王楠;董欣茹;鄭永輝;劉強;史孝杰;楊青青;孫霞
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，該試紙條包括PVC底板、樣品墊、金標墊、檢測線、質控線、硝基纖維素膜、吸水墊；所述金標墊上包被有膠體金標記的有機磷農藥廣譜抗體、氨基甲酸酯類廣譜抗體和擬除蟲菊酯類農藥廣譜抗體混合物；所述檢測線包被有機磷農藥通用抗原、氨基甲酸酯類通用抗原及擬除蟲菊酯類農藥通用抗原；所述質控線上包被兔抗鼠IgG抗體。通過對試紙條的細節因素的把控，接近被檢測農藥蛋白質的等電點，從而使其與抗原形成更牢固的結合物。該試紙條可對蔬菜、水果等農產品中大部分有機磷農藥、氨基甲酸酯類農藥及擬除蟲菊酯類農藥進行檢測，現象直觀，靈敏度高。

技術領域

本發明涉及生物工程檢測技術領域，采用一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條對蔬菜中多種農藥殘留進行一次性檢測。

背景技術

我國大部分農業生產中使用化學性農藥較多，有時為使得效果更好會超標使用農藥。如果不按規定的用藥量、次數、方法或安全間隔期施藥，或施用了不該使用的農藥，就會引起農藥超標或農藥中毒。

在我國農藥中，70％為有機磷農藥，而在我國生產使用的有機磷農藥中，70％為劇毒、高毒類，而且較多是禁止在蔬菜作物上使用的。

擬除蟲菊酯類農藥是20世紀70年代研發的一類仿生合成殺蟲劑，是一種可以防治多種害蟲的廣譜性殺蟲劑，具有性質穩定，不宜光解，無特殊臭味，觸殺作用強，使用濃度低以及殘效時間長等特點。

氨基甲酸酯類農藥用作農藥的殺蟲劑、除草劑、殺菌劑等。

現在實行的農藥殘留檢測方法大部分需要通過有機溶劑提取凈化和用大型分析儀器進行，無法對廉價蔬菜進行快速的檢測。目前，實驗室用于農殘檢測的方法多為色譜方法或毛細管電泳方法，這類方法檢測的周期長、成本高、操作不簡便，樣本制備復雜，難以及時快速地進行檢測。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條的研發，具體涉及一種在一個試紙條上實現抗原抗體特異性結合從而檢測農藥殘留情況。檢測過程相較于市場中存在的農藥殘留檢測儀，操作簡單，靈敏度高。本發明通過以下步驟來實現。

為了達到一次性檢測多類農殘的目的，本發明方法根據果蔬中常見的有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類農藥的共性結構，得到與上述農藥具有共性結構的半抗原偶聯物，分別免疫小鼠，得到識別有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類農藥的廣譜抗體。通過抗原抗體免疫反應，使試紙條能快速檢測出具有特定基團的有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類農藥，無需針對每一個有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類農藥選擇試紙條逐一測試。

一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，該試紙條包括PVC底板、樣品墊、金標墊、檢測線、質控線、硝基纖維素膜、吸水墊，其特征在于：所述樣品墊、金標墊、檢測線、質控線、硝基纖維素膜、吸水墊均設置在PVC底板的上方，所述樣品墊設置在PVC底板的邊緣；硝基纖維素膜上靠近金標墊的一端噴涂有檢測線，靠近吸水墊的一端噴涂有質控線，從金標墊往吸水墊方向依次為有機磷農藥檢測線（T1）、氨基甲酸酯類農藥檢測線（T2）、擬除蟲菊酯類農藥（T3）；所述樣品墊和金標墊為玻璃纖維膜，金標墊上包被有膠體金標記的有機磷農藥廣譜抗體、氨基甲酸酯類廣譜抗體和擬除蟲菊酯類農藥廣譜抗體混合物，其中，所述有機磷農藥廣譜抗體、氨基甲酸酯類廣譜抗體和擬除蟲菊酯類農藥廣譜抗體偶聯到 20 ～ 25nm 氯金酸膠體顆粒表面所得；所述檢測線包被有機磷農藥通用抗原、氨基甲酸酯類通用抗原及擬除蟲菊酯類農藥通用抗原；所述質控線上包被兔抗鼠IgG抗體。

圖1為所述有機磷農藥通用半抗原；

圖2為所述氨基甲酸酯類通用半抗原；

圖3為所述擬除蟲菊酯類通用半抗原。

本發明所述檢測有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：