[發明專利]一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條

在審

• 申請號: 201910329451.2
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN110045115A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 郭業民;劉曉晗;王楠;董欣茹;鄭永輝;劉強;史孝杰;楊青青;孫霞
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，該試紙條包括PVC底板、樣品墊、金標墊、檢測線、控制線、硝基纖維素膜、吸水墊，其特征在于：所述樣品墊、金標墊、檢測線、控制線、硝基纖維素膜、吸水墊均設置在PVC底板的上方，所述樣品墊設置在PVC底板的邊緣；硝基纖維素膜上靠近金標墊的一端噴涂有檢測線，靠近吸水墊的一端噴涂有質控線，從金標墊往吸水墊方向依次為有機磷農藥檢測線（T1）、氨基甲酸酯類農藥檢測線（T2）、擬除蟲菊酯類農藥（T3）；所述樣品墊和金標墊為玻璃纖維膜，金標墊上包被有膠體金標記的有機磷農藥廣譜抗體、氨基甲酸酯類廣譜抗體和擬除蟲菊酯類農藥廣譜抗體混合物，其中，所述有機磷農藥廣譜抗體、氨基甲酸酯類廣譜抗體和擬除蟲菊酯類農藥廣譜抗體偶聯到 20 ～ 25nm 氯金酸膠體顆粒表面所得；所述檢測線包被有機磷農藥通用抗原、氨基甲酸酯類通用抗原及擬除蟲菊酯類農藥通用抗原；所述控制線上包被兔抗鼠IgG抗體；所述有機磷農藥通用半抗原如式1所示，所述氨基甲酸酯類通用半抗原如式2所示，所述擬除蟲菊酯類通用半抗原如式 3所示：

所述有機磷通用半抗原如式1所示：

所述氨基甲酸酯類通用半抗原如式2所示：

所述擬除蟲菊酯類通用半抗原如式3所示：

。

2.根據權利要求 1 所述的基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，其特征在于，所述樣品墊、金標墊、硝基纖維素膜和吸水墊之間設有1～1.5mm的重疊區；所述檢測線之間，檢測線和質控線間隔0.5～0.8cm。

3.根據權利要求 1 所述的基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，其特征在于，所述底板為 PVC 板，所述反應膜為硝酸纖維素膜，所述樣品墊由玻璃纖維膜或濾紙制成，所述吸水紙由濾紙制成。

4.根據權利要求 1 所述的基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，其特征在于，所述有機磷農藥金標廣譜抗體的標金量、氨基甲酸酯類農藥金標廣譜抗體的標金量、擬除蟲菊酯類農藥金標廣譜抗體的標金量是 15 ～ 25μg/mL，金標墊上包被的有機磷農藥金標寬譜抗體的濃度為、氨基甲酸酯類農藥金標寬譜抗體的濃度為、擬除蟲菊酯類農藥金標寬譜抗體的濃度為 15 ～ 25μg/mL。

5.根據權利要求 1 所述的基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條，其特征在于，有機磷農藥、氨基甲酸酯類農藥、擬除蟲菊酯類農藥廣譜抗體偶聯到氯金酸膠體顆粒表面時，所用氯金酸膠體顆粒溶液中加入的碳酸鉀溶液（0.1mol/L）為9μL/mL。

6.如權利要求1所述的基于廣譜性抗體識別的蔬菜中農藥多殘留檢測試紙條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)制備通用半抗原-載體蛋白偶聯物：將有機磷農藥通用半抗原、氨基甲酸酯類農藥通用半抗原、擬除蟲菊酯類農藥通用半抗原分別與血藍蛋白或甲狀腺蛋白進行偶聯，分別制備通用半抗原偶聯物；

(2)制備有機磷農藥、氨基甲酸酯類農藥通用抗體和擬除蟲菊酯類農藥通用抗體：將通用半抗原偶聯物多次免疫小鼠，取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞在體外進行融合，制備雜交瘤細胞，將陽性雜交瘤細胞注入小鼠腹腔收集腹水，或以體外細胞培養的收集上清液的方式制備有機磷農藥通用抗體、氨基甲酸酯類農藥通用抗體和擬除蟲菊酯類通用抗體；

(3)制備膠體金：以檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，膠體金顆粒直徑在20～25nm之間；

(4)膠體金標記抗體：將膠體金溶液分別與有機磷農藥通用抗體、氨基甲酸酯類農藥通用抗體和擬除蟲菊酯類通用抗體按相應比例混勻，通過離心純化、濃縮，制備成膠體金標記的有機磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農藥通用抗體混合物；

(5)將膠體金標記的有機磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農藥通用抗體混合物噴涂并固定在金標墊上，將有機磷半抗原偶聯物包被在靠近樣品墊端的檢測線T1上，將氨基甲酸酯半抗原偶聯物包被在檢測線T2上，將兔抗鼠IgG抗體包被在質控線上，并充分干燥；

(6)將硝基纖維素膜、金標墊、樣品墊、吸水墊依次粘合在PVC底板上，切成條狀，即制成檢測有機磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農藥殘留的膠體金免疫層析試紙條。