[發明專利]一種用于熒光成像介導的光熱和化學聯合腫瘤治療的光熱試劑的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201910326184.3
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN109999198A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 沈龍祥;潘登余;耿弼江
• 申請（專利權）人: 上海市第六人民醫院
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00;A61K49/00;A61K9/127;A61P35/00;A61K31/704
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 車超平

1.一種用于熒光成像介導的光熱和化學聯合腫瘤治療的光熱試劑的制備方法，其特征在于，所述光熱試劑為熱敏性脂質體-吲哚菁綠-碳點-阿霉素復合納米顆粒，所述制備方法包括：

步驟a)稱量二棕櫚酰基卵磷脂、氫化大豆磷脂、高純膽固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、吲哚菁綠，于氯仿和甲醇混合溶液中溶解，旋轉蒸發除去有機溶劑，并進一步干燥得到薄脂質膜；

步驟b)將步驟a)得到的薄脂質膜在含有碳點的硫酸銨溶液中水化，對水化溶液進行超聲處理以形成均勻的懸浮液，將所述懸浮液通過脂質體擠出器擠出，使用凝膠層析柱除去游離的吲哚菁綠和碳點，獲得中間液；

步驟c)向步驟b)獲得的中間液中加入含有碳點的硫酸銨溶液在旋轉蒸發儀里水化，水化結束后超聲處理，使其充分分散，用脂質體擠出器將其擠出，將擠出后的溶液以磷酸鹽緩沖液為透析液透析，獲得脂質體溶液；

步驟d)將阿霉素和步驟b)中獲得的脂質體溶液共孵育過夜，采用凝膠分離柱分離去除游離的阿霉素，收集得到的洗脫液為熱敏性脂質體-吲哚菁綠-碳點-阿霉素復合納米顆粒。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟a)中，二棕櫚酰基卵磷脂、氫化大豆磷脂、高純膽固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、吲哚菁綠的摩爾比為40～60：20～30：10～20：2～4：0.5～2，混合后總磷脂濃度為5～60mg/mL；所述氯仿和甲醇的體積比為3～5：1；所述步驟d)中阿霉素和脂質體溶液的體積比為0.5～2：1。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b)和所述步驟c)中，所述旋轉蒸發溫度、水化溫度、超聲處理溫度均為40～60℃，所述水化時間均為1～4小時，所述超聲處理時間均為3～8分鐘。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b)中，所述碳點在硫酸銨溶液中的濃度為200～800μg/mL；所述步驟c)中，所述碳點在硫酸銨溶液中的濃度為1～4mg/mL。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b)和所述步驟c)中，所述脂質體擠出器均為濾膜為100nm的聚碳酸酯濾器，所述擠出次數均為20～60次。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b)中，所述凝膠層析柱為sephadex G-150柱；所述步驟c)中，所述透析為采用pH＝7.4的磷酸鹽緩沖液作為透析液透析0.5～2天，脂質體擠出器擠出的脂質體溶液與磷酸鹽緩沖液的體積比為1：150～300，透析液更換2～4次；所述步驟d)中，所述凝膠分離柱為葡聚糖G-150凝膠分離柱，其采用磷酸鹽緩沖液作為洗脫液，脂質體先于游離小分子阿霉素被洗脫。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述中間液和脂質體溶液均需低溫保存，保存溫度為2～8℃。