[發明專利]一種外源基因的檢測方法與試劑盒

在審

• 申請號: 201910320127.4
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN110172504A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 彭海
• 申請（專利權）人: 武漢明了生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 南京中高專利代理有限公司 32333
• 代理人: 祝進

本發明公開了一種外源基因的檢測方法與試劑盒，屬于生物檢測領域。所述檢測方法包括：確定待測樣品中需要檢測的外源基因和待測樣品中的內源標準基因；根據外源基因的人工序列、外源基因的邊界序列或內源標準基因的序列制備雜交探針；提取并純化待測樣品的基因組DNA和質控樣品的基因組DNA并分別進行片段化；在待測樣品DNA片段和質控樣品DNA片段上分別連接上接頭序列；利用模板片段和外源基因的特征片段對待測樣品中的外源基因進行檢測，判定外源基因是否存在于待測樣品中。該方法能夠避免因微生物感染、氣溶膠污染造成的假陽性結果，還能夠避免因PCR擴增效率等因素導致的定量不準確的問題。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及一種外源基因的檢測方法與試劑盒。

背景技術

轉基因作物的商業化開發出現在1996年，隨著生物技術的發展，轉基因植物產品的種類逐年增加。根據國際農業生物技術應用服務組織(International Service for theAcquisition of Agri-biotech Applications，ISAAA)的報告，截止到2013年，全世界已經有27種轉基因作物類型和336種轉基因作物品種被開發出來，在這27年中，全球轉基因作物種植面積達到1.75億公頃。在中國，截止到 2015年，已經有37種轉基因作物被批準進口，并用作加工原料。在中國在內的許多國家中，因為政府和公眾擔心轉基因產品的食品安全或環境安全，對轉基因產品持有不信任的態度。為了保護公眾的知情權，中國在內的許多國家均通過立法對轉基因產品中的轉基因食品與飼料進行管制和跟蹤。為了適應轉基因產品立法要求和確保產品的合法與可追蹤，有效且精準的轉基因篩選、鑒定和定量方法是十分必要的。

目前用于檢測外源基因的方法基本上是通過一次轉基因事件來確認外源基因是否存在，例如，以cryIAb基因上的序列和水稻上的序列為組合的引物進行 PCR(PolymeraseChain Reaction，聚合酶鏈式反應)擴增，若有擴增產物，則證明有cryIAb基因與水稻序列的連接產物，從而確認存在外源基因cryIAb。

在實現本發明的過程中，發明人發現現有技術至少存在以下問題：

但當cryIAb轉到另一種水稻品種或玉米品種中時，就得根據cryIAb在新的轉基因事件中連接的新的水稻品種或玉米品種的基因組序列設計新的引物組合來進行檢測新的轉基因事件，新的轉基因事件層出不窮，這意味著要設計無數種引物組合進行檢測，這工作量是極大的。同時，若新的轉基因事件未知或者與cryIAb連接的序列未知，就沒有辦法設計新的引物組合，導致該轉基因事件不可檢測。同時，大部分轉基因元件都起源于微生物，而在生物生長過程中可能受到微生物感染，因此，檢出轉基因元件不代表一定是轉基因陽性產品。現有的所有檢測技術僅能根據轉基因元件對轉基因產品進行篩選，同時，還需要根據轉基因事件的檢測結果進行確定。因此，目前的檢測技術不能直接確認轉基因產品。轉基因事件檢測也同樣存在問題。由于轉基因產品與轉基因新事件都十分繁雜，現有的技術都只能檢測有限的幾種已知的轉基因事件。如果希望確認產品為非轉基因產品，就需要進行大量的轉基因檢測，這不僅耗時而且極大的增加了檢測的成本，致使其在轉基因檢測應用中不具有可行性。

現有的轉基因檢測方法都是基于PCR反應進行的，PCR產物形成的氣溶膠可能污染實驗室。為了避免氣溶膠的影響，轉基因檢測的實驗室要求很高，需要形成負壓，對實驗人員操作要求也十分嚴格。即使如此，由于污染導致的轉基因檢測的假陽性也時常出現，即使是取得了資質的實驗室，也常常因為氣溶膠的污染而影響檢測結果。現有的轉基因檢測方法可能受到微生物的感染，從而造成假陽性檢測結果。

發明內容

為了解決現有技術的問題，本發明實施例提供了一種外源基因檢測方法與試劑盒。所述技術方案如下：

本發明實施例提供了一種外源基因的檢測方法，所述檢測方法包括：

確定待測樣品中需要檢測的外源基因和所述待測樣品中的內源標準基因；