[發(fā)明專利]一種外源基因的檢測方法與試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910320127.4
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN110172504A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 彭海
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢明了生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 南京中高專利代理有限公司 32333
• 代理人: 祝進(jìn)

本發(fā)明公開了一種外源基因的檢測方法與試劑盒，屬于生物檢測領(lǐng)域。所述檢測方法包括：確定待測樣品中需要檢測的外源基因和待測樣品中的內(nèi)源標(biāo)準(zhǔn)基因；根據(jù)外源基因的人工序列、外源基因的邊界序列或內(nèi)源標(biāo)準(zhǔn)基因的序列制備雜交探針；提取并純化待測樣品的基因組DNA和質(zhì)控樣品的基因組DNA并分別進(jìn)行片段化；在待測樣品DNA片段和質(zhì)控樣品DNA片段上分別連接上接頭序列；利用模板片段和外源基因的特征片段對待測樣品中的外源基因進(jìn)行檢測，判定外源基因是否存在于待測樣品中。該方法能夠避免因微生物感染、氣溶膠污染造成的假陽性結(jié)果，還能夠避免因PCR擴(kuò)增效率等因素導(dǎo)致的定量不準(zhǔn)確的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別涉及一種外源基因的檢測方法與試劑盒。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化開發(fā)出現(xiàn)在1996年，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品的種類逐年增加。根據(jù)國際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用服務(wù)組織(International Service for theAcquisition of Agri-biotech Applications，ISAAA)的報告，截止到2013年，全世界已經(jīng)有27種轉(zhuǎn)基因作物類型和336種轉(zhuǎn)基因作物品種被開發(fā)出來，在這27年中，全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積達(dá)到1.75億公頃。在中國，截止到 2015年，已經(jīng)有37種轉(zhuǎn)基因作物被批準(zhǔn)進(jìn)口，并用作加工原料。在中國在內(nèi)的許多國家中，因為政府和公眾擔(dān)心轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的食品安全或環(huán)境安全，對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品持有不信任的態(tài)度。為了保護(hù)公眾的知情權(quán)，中國在內(nèi)的許多國家均通過立法對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中的轉(zhuǎn)基因食品與飼料進(jìn)行管制和跟蹤。為了適應(yīng)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品立法要求和確保產(chǎn)品的合法與可追蹤，有效且精準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因篩選、鑒定和定量方法是十分必要的。

目前用于檢測外源基因的方法基本上是通過一次轉(zhuǎn)基因事件來確認(rèn)外源基因是否存在，例如，以cryIAb基因上的序列和水稻上的序列為組合的引物進(jìn)行 PCR(PolymeraseChain Reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增，若有擴(kuò)增產(chǎn)物，則證明有cryIAb基因與水稻序列的連接產(chǎn)物，從而確認(rèn)存在外源基因cryIAb。

在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題：

但當(dāng)cryIAb轉(zhuǎn)到另一種水稻品種或玉米品種中時，就得根據(jù)cryIAb在新的轉(zhuǎn)基因事件中連接的新的水稻品種或玉米品種的基因組序列設(shè)計新的引物組合來進(jìn)行檢測新的轉(zhuǎn)基因事件，新的轉(zhuǎn)基因事件層出不窮，這意味著要設(shè)計無數(shù)種引物組合進(jìn)行檢測，這工作量是極大的。同時，若新的轉(zhuǎn)基因事件未知或者與cryIAb連接的序列未知，就沒有辦法設(shè)計新的引物組合，導(dǎo)致該轉(zhuǎn)基因事件不可檢測。同時，大部分轉(zhuǎn)基因元件都起源于微生物，而在生物生長過程中可能受到微生物感染，因此，檢出轉(zhuǎn)基因元件不代表一定是轉(zhuǎn)基因陽性產(chǎn)品。現(xiàn)有的所有檢測技術(shù)僅能根據(jù)轉(zhuǎn)基因元件對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行篩選，同時，還需要根據(jù)轉(zhuǎn)基因事件的檢測結(jié)果進(jìn)行確定。因此，目前的檢測技術(shù)不能直接確認(rèn)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。轉(zhuǎn)基因事件檢測也同樣存在問題。由于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品與轉(zhuǎn)基因新事件都十分繁雜，現(xiàn)有的技術(shù)都只能檢測有限的幾種已知的轉(zhuǎn)基因事件。如果希望確認(rèn)產(chǎn)品為非轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品，就需要進(jìn)行大量的轉(zhuǎn)基因檢測，這不僅耗時而且極大的增加了檢測的成本，致使其在轉(zhuǎn)基因檢測應(yīng)用中不具有可行性。

現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因檢測方法都是基于PCR反應(yīng)進(jìn)行的，PCR產(chǎn)物形成的氣溶膠可能污染實(shí)驗室。為了避免氣溶膠的影響，轉(zhuǎn)基因檢測的實(shí)驗室要求很高，需要形成負(fù)壓，對實(shí)驗人員操作要求也十分嚴(yán)格。即使如此，由于污染導(dǎo)致的轉(zhuǎn)基因檢測的假陽性也時常出現(xiàn)，即使是取得了資質(zhì)的實(shí)驗室，也常常因為氣溶膠的污染而影響檢測結(jié)果。現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因檢測方法可能受到微生物的感染，從而造成假陽性檢測結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種外源基因檢測方法與試劑盒。所述技術(shù)方案如下：

本發(fā)明實(shí)施例提供了一種外源基因的檢測方法，所述檢測方法包括：

確定待測樣品中需要檢測的外源基因和所述待測樣品中的內(nèi)源標(biāo)準(zhǔn)基因；