[發(fā)明專利]一種辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測及應(yīng)用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910318174.5
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN109929922A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅阿東;王艷;吳山楠;蔡秋
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術(shù)中心（貴州國際旅行衛(wèi)生保健中心）
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6806
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測及應(yīng)用方法，辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測方法為：樣品前處理；選用改良后的核酸提取方法；針對辣椒轉(zhuǎn)基因基團設(shè)計特異性的熒光PCR引物、探針，建立并優(yōu)化反應(yīng)條件，達到最佳反應(yīng)設(shè)置；應(yīng)用方法為：對以上建立的實時熒光PCR檢測方法進行方法驗證，同時對檢測的特異性、準確性、靈敏度進行驗證；通過對收集的樣品進行應(yīng)用檢測的結(jié)果，對市場上的辣椒及制品進行轉(zhuǎn)基因調(diào)查。本發(fā)明針對辣椒及制品的核酸提取，建立了最大核酸提取效率的方法，并且對辣椒及制品建立了一種通用性強、檢測快速、準確的實時熒光PCR方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測及應(yīng)用方法。

背景技術(shù)

目前，業(yè)內(nèi)常用的現(xiàn)有技術(shù)是這樣的：隨著辣椒消費需求的不斷增加及初加工、深加工行業(yè)的不斷發(fā)展，國際加工辣椒需求量的增加，辣椒的產(chǎn)量和品質(zhì)倍受關(guān)注，然而病蟲害及不良環(huán)境因素嚴重影響了辣椒產(chǎn)量和品質(zhì)的提高。較常規(guī)育種而言，轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)有著育種周期短、克服遠緣雜交不親和等優(yōu)點。但是由于對轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品的安全性存在爭議，對人類健康和生態(tài)環(huán)境的潛在威脅受到國際社會和廣大民眾的廣泛關(guān)注，同時受國際政治和經(jīng)濟因素的影響，許多國家出臺了嚴格的管理法規(guī)，目前全球已有65個國家和地區(qū)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品實行強制性標識管理制度，少部分國家或地區(qū)實行自愿標識制度。歐盟、澳大利亞、俄羅斯、日本、韓國等國家和地區(qū)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標簽制度，要求食品中轉(zhuǎn)基因成分含量超過1％或5％的必須實施標簽，而歐盟的要求閾值更加嚴格，由原來的1％(1997年)提高到0.9％(2003年)。在這些國家和地區(qū)對轉(zhuǎn)基因的管理法規(guī)越來越嚴格的形勢下，我國作為辣椒的種植、生產(chǎn)、出口大國，容易受到嚴重的影響，尤其是在全國辣椒及制品出口額逐年上升的良好態(tài)勢下，轉(zhuǎn)基因的風險系數(shù)不斷提高。目前已出現(xiàn)部分出口產(chǎn)品因轉(zhuǎn)基因問題而出現(xiàn)拒收、退運等情況，因此，對辣椒及制品進行轉(zhuǎn)基因風險分析勢在必行。

由于轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品的安全性成為全球范圍內(nèi)的關(guān)注熱點，對轉(zhuǎn)基因成分的檢測越來越受到重視。DNA是遺傳信息的載體，提取高質(zhì)量的DNA分子是植物基因組學(xué)及轉(zhuǎn)基因檢測研究的基礎(chǔ)，通常要求所提取的DNA分子應(yīng)具有較高的純度，且無斷裂、降解現(xiàn)象，提取過程盡量少使用有毒的化學(xué)藥品以保證下游工作的進行。由于辣椒制品成分復(fù)雜，辣椒中富含的酚類化合物、蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)會抑制DNA提取質(zhì)量；同時還含有鹽、糖、油、色素等食品添加劑，此外，加工過程中的煎、炸、煮、烤等工藝也會使原料中的DNA會受到不同程度的損壞。因此，從加工食品中提取DNA比從原材料中提取DNA相對的困難。所以，目前國內(nèi)外對辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)研究較少，檢測技術(shù)無法跟進辣椒轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，既不利于轉(zhuǎn)基因物種監(jiān)管，也不利于避免國際貿(mào)易中設(shè)置的技術(shù)壁壘。因此，對辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測方法的研究，建立快速、準確的檢測技術(shù)就顯得尤為迫切。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：

由于辣椒制品成分復(fù)雜，辣椒中富含的酚類化合物、蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)會抑制DNA提取質(zhì)量；同時還含有鹽、糖、油、色素等食品添加劑，此外，加工過程中的煎、炸、煮、烤等工藝也會使原料中的DNA會受到不同程度的損壞。因此，從加工食品中提取DNA比從原材料中提取DNA相對的困難。所以目前國內(nèi)外對辣椒及制品中轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)研究較少，檢測技術(shù)無法跟進辣椒轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，既不利于轉(zhuǎn)基因物種監(jiān)管，也不利于避免國際貿(mào)易中設(shè)置的技術(shù)壁壘。

解決上述技術(shù)問題的難度和意義：

目前針對辣椒的轉(zhuǎn)基因研究，多集中于遺傳育種研究機構(gòu)對其各自研發(fā)品種進行的分析，如進行轉(zhuǎn)抗菌肽基因辣椒蛋白質(zhì)檢測，辣椒農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化體系的建立及外源基因的轉(zhuǎn)化、抗CMV和TMV轉(zhuǎn)基因線辣椒等，為辣椒轉(zhuǎn)基因品種的表達分析研究，沒有針對市場上常見辣椒轉(zhuǎn)基因品種進行有效的、通用的檢測技術(shù)研究，檢測技術(shù)無法跟進辣椒轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，既不利于轉(zhuǎn)基因物種監(jiān)管，也不利于避免國際貿(mào)易中設(shè)置的技術(shù)壁壘。