[發(fā)明專利]一種干細胞體外誘導培育心肌細胞的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910314980.5
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN110157663B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設計）人: 陳忠平
• 申請（專利權）人: 朗姿賽爾生物科技（廣州）有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 廣州一銳專利代理有限公司 44369
• 代理人: 楊昕昕

本發(fā)明涉及干細胞領域，提供一種干細胞體外誘導培育心肌細胞的方法，用于解決干細胞向心肌細胞分化時分化率低的問題。本發(fā)明提供的一種干細胞體外誘導培育心肌細胞的方法，取自體干細胞制成單細胞懸液，制備擬胚體；將制備好的擬胚體轉移到明膠包被的孔板，每孔一個擬胚體添加誘導分化培養(yǎng)基，進行干預分化培養(yǎng)；所述誘導分化培養(yǎng)基中包括丹酚酸B 0.7~1.2mg/L、人參皂苷0.5~1.5mg/mL、淫羊藿苷0.8~1.2mg/L。可以得到足量且可以有效提高細胞移植療法成功率的心肌細胞。

技術領域

本發(fā)明涉及干細胞領域，具體涉及一種干細胞體外誘導培育心肌細胞的方法。

背景技術

由心肌細胞功能障礙引起的心臟衰竭是世界范圍內的一種主要的疾病，心衰患者死亡的主要原因是心臟泵血功能喪失或心率不齊。嚴重的心衰患者一年期死亡率超過50%。雖然晚期患者可以進行心臟移植，然后由于供體器官一直處于嚴重的供不應求的狀態(tài)。由于心力衰竭的高發(fā)病率和死亡率、移植心臟的死亡、免疫排斥反應等并發(fā)癥以及移植心臟后期失效等客觀現狀，亟待發(fā)展新的治療方法以提高心肌細胞的功能，阻止心力衰竭的發(fā)生。目前對心力衰竭的治療方法主要集中于早期血管再生和抑制進一步的心肌細胞損失，而心肌細胞是一種終端分化的細胞，增殖能力極其有限，損失后極難恢復。

心肌細胞移植療法著重于重建心肌功能，恢復再生心肌組織的泵血能力，也有研究發(fā)現注入心臟的心肌細胞能夠形成新的心肌組織。但細胞移植治療關鍵因素是確定合適的供體細胞類型。因此，如何誘導干細胞定向分化為心肌細胞，并如何提高干細胞向心肌細胞的分化率是用于醫(yī)藥治療是亟待解決的技術難題。

發(fā)明內容

本發(fā)明解決的技術問題為干細胞向心肌細胞分化時分化率低的問題，提供一種干細胞體外誘導培育心肌細胞的方法。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供的技術方案為：

一種干細胞體外誘導培育心肌細胞的方法，S11.取自體干細胞制成單細胞懸液；S12.將單細胞懸液細胞計數后用分化培養(yǎng)基將其稀釋成細胞濃度為10^-5~10^-3cells/mL的干細胞懸液，接種于細菌培養(yǎng)皿的蓋子內表面上，翻轉培養(yǎng)皿蓋子，使蓋子上的干細胞形成懸滴，培養(yǎng)皿中加入水或水溶液以保持懸滴在孵育過程中的濕度，培養(yǎng)皿置于5%CO₂、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~3天；S13.收集培養(yǎng)皿蓋子上懸滴中形成的擬胚體，將其轉移到盛有分化培養(yǎng)基的細菌培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)懸浮，促使擬胚體進一步增殖；S14.將制備好的擬胚體轉移到明膠包被的孔板，每孔一個擬胚體添加誘導分化培養(yǎng)基，進行干預分化培養(yǎng)；所述誘導分化培養(yǎng)基中包括丹酚酸B 0.7~1.2mg/L、人參皂苷0.5~1.5mg/mL、淫羊藿苷0.8~1.2mg/L。

將自體干細胞誘導分化為心肌細胞，將得到的心肌細胞作為心肌細胞移植療法的細胞供體可以降低原有細胞對移植的心肌細胞的排斥反應，提高心肌細胞移植的成功率；利用丹酚酸B、人參皂苷和淫羊藿苷誘導干細胞轉變?yōu)樾募〖毎梢蕴岣吒杉毎D化為心肌細胞的分化率。

自體干細胞經丹酚酸B、人參皂苷和淫羊藿苷的混合物在培養(yǎng)基中誘導分化，可以得到足量且可以有效提高細胞移植療法成功率的心肌細胞。

優(yōu)選地，所述誘導分化培養(yǎng)基中還包括GMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、非必需氨基酸、50mmol/L的丙酮酸鈉水溶液和0.1mol/L的二巰基乙醇水溶液，所述GMEM培養(yǎng)基：胎牛血清：非必需氨基酸：50mmol/L的丙酮酸鈉水溶液：0.1mol/L的二巰基乙醇水溶液=73.5:24:1:1.3:0.2。通過優(yōu)化培養(yǎng)基中各主要物質的含量，可以提高干細胞分化為心肌細胞的分化率。