[發明專利]液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法及檢測試劑

在審

• 申請號: 201910313350.6
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN109946404A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 茆勇;華東;盛青松;辛君偉
• 申請（專利權）人: 茆勇
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217
• 代理人: 高正方

本發明公開了一種液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法及檢測試劑，所述方法包括以下步驟：（（ⅰ）配制標準溶液；（ⅱ）配制內標溶液；（ⅲ）樣本預處理；（ⅳ）標準曲線繪制；（ⅴ）測定血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度。所述檢測試劑包括流動相A、流動相B、標準溶液和內標溶液。本發明提供了一種液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法，該方法伊馬替尼和內標物卡馬西平能完全分離，且受內生物質雜質峰影響小，回收率和精密度高。

技術領域

本發明屬于甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的檢測方法，具體涉及一種液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法及檢測試劑。

背景技術

甲磺酸伊馬替尼（imatinib）是第一代的小分子絡氨酸激酶抑制劑。甲磺酸伊馬替尼是瞄準慢性髓系白血病(CML)致病原因的小分子靶向藥物，同時是推薦用于治療轉移、復發、不可切除等胃腸間質瘤（GIST）的一線用藥和術后輔助用藥，但該藥療效和毒性個體差異大，如性別、藥物代謝等，并且易受其他藥物影響，進行血藥濃度監測可保證療效并預測、減輕毒性，改善患者生活質量、延長生存期。目前臨床檢驗常用的檢測技術主要基于免疫分析方法，但是免疫分析對小分子化合物的檢測有先天缺陷。即使采用單克隆抗體，這些抗體對于小分子化合物的單個分子結構精確識別也存在困難。另外，大多數抗體在檢測分子結構相似的化合物時，容易導致交叉反應，伊馬替尼的代謝產物可能會干擾檢測，產生假陽性檢測結果。

LC-MS/MS法是臨床檢測中的金標準，與臨床主要分析方法免疫法相比，其方法靈敏度高以及特異性高，同時試劑成本低廉、檢測速度快、檢測通量高。

發明內容

本發明是為了克服現有技術中存在的缺點而提出的，其目的是提供一種液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法及檢測試劑。

本發明的技術方案是：

一種液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法，包括以下步驟：

（ⅰ）配制標準溶液

稱取甲磺酸伊馬替尼標準品，用甲醇溶解，配制成標準溶液；

（ⅱ）配制內標溶液

稱取卡馬西平，用甲醇溶解，配制成內標溶液；

（ⅲ）樣本預處理

用移液器精密吸取卡馬西平加入到血漿中，渦旋混勻后，用移液器吸取甲醇，將血漿的蛋白析出，渦旋震蕩，充分萃取后，進行離心，離心后用針筒吸取上清液，用濾膜過濾，得到樣品，并注入到進樣瓶中，待分析；

（ⅳ）標準曲線繪制

配置不同濃度的標準溶液，每個濃度分別加入到含有血漿的離心管中，渦旋混勻；混勻后加入內標溶液，渦旋混勻，用移液器吸取甲醇，將血漿的蛋白析出，渦旋震蕩，充分萃取后，進行離心，離心后用針筒吸取上清液，用濾膜過濾，樣品注入到進樣瓶中，用液相色譜串聯質譜進樣分析，以伊馬替尼質量濃度為橫坐標，伊馬替尼與內標物的峰面積比值為縱坐標，繪制標準曲線；

所述液相色譜的分析條件為：

色譜柱：Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18(4.6*50mm)2.7-Micron；

流動相：流動相A為體積分數0.2%的甲酸，流動相B為乙腈；

流速：0.5ml/min；

進樣量10ul；

檢測波長282、272；

柱溫35℃；