[發明專利]液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法及檢測試劑

在審

• 申請號: 201910313350.6
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN109946404A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 茆勇;華東;盛青松;辛君偉
• 申請（專利權）人: 茆勇
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217
• 代理人: 高正方

1. 一種液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（ⅰ）配制標準溶液

稱取甲磺酸伊馬替尼標準品，用甲醇溶解，配制成標準溶液；

（ⅱ）配制內標溶液

稱取卡馬西平，用甲醇溶解，配制成內標溶液；

（ⅲ）樣本預處理

用移液器精密吸取卡馬西平加入到血漿中，渦旋混勻后，用移液器吸取甲醇，將血漿的蛋白析出，渦旋震蕩，充分萃取后，進行離心，離心后用針筒吸取上清液，用濾膜過濾，得到樣品，并注入到進樣瓶中，待分析；

（ⅳ）標準曲線繪制

配置不同濃度的標準溶液，每個濃度分別加入到含有血漿的離心管中，渦旋混勻；混勻后加入內標溶液，渦旋混勻，用移液器吸取甲醇，將血漿的蛋白析出，渦旋震蕩，充分萃取后，進行離心，離心后用針筒吸取上清液，用濾膜過濾，樣品注入到進樣瓶中，用液相色譜串聯質譜進樣分析，以伊馬替尼質量濃度為橫坐標，伊馬替尼與內標物的峰面積比值為縱坐標，繪制標準曲線；

所述液相色譜的分析條件為：

色譜柱：Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18(4.6*50mm)2.7-Micron；

流動相：流動相A為體積分數0.2%的甲酸，流動相B為乙腈；

流速：0.5ml/min；

進樣量10ul；

檢測波長282、272；

柱溫35℃；

液相色譜洗脫條件：在0 min ~1.5 min內流動相A和流動相B的體積比逐漸從70:30均勻下降至10:90；在1.5 min ~4.5 min內流動相A和流動相B的體積比保持在10:90；在4.5min ~5 min內流動相A和流動相B的體積比逐漸從10:90均勻上升至70:30；在5 min ~8 min內流動相A和流動相B的體積比保持在70:30；

所述質譜的分析條件為：

離子源：ESI＋；

檢測模式：多離子反應監測；

監測離子對：m/z 494.3→m/z 394.2(1)、m/z237.3→m/z194.1(2)；

碎裂電壓：100v（1）、135v（2）；

碰撞能量：20ev（1）、15ev（2）；

干燥氣溫度：350℃；

干燥氣流速：8L/min；

霧化氣壓力：30psi；

毛細管電壓：4kv；

（ⅴ）測定血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度

根據步驟（ⅳ）中的液相色譜的分析條件和質譜的分析條件，對預處理后的樣本進行測定，獲得樣本血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度。

2.根據權利要求1所述的液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法，其特征在于：所述步驟（ⅲ）樣本預處理中卡馬西平、血漿和甲醇的體積比為1：10：40。

3.根據權利要求1所述的液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的方法，其特征在于： 所述流動相A中添加20mmol/L乙酸銨。

4.用于權利要求1至3任意一項所述的液相色譜串聯質譜檢測血漿中甲磺酸伊馬替尼血藥濃度的檢測試劑，其特征在于：

所述檢測試劑包括流動相A、流動相B、標準溶液和內標溶液；

所述流動相A為體積分數0.2%的甲酸溶液，且其中添加乙酸銨，乙酸銨的濃度為20mmol/L；

所述流動相B為經過濾、超聲處理的乙腈；

所述標準溶液為甲磺酸伊馬替尼標準品的甲醇溶液；

所述內標溶液為卡馬西平的甲醇溶液。