[發(fā)明專利]數(shù)字PCR的實驗方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910307243.2 | 申請日： | 2019-04-16 |
| 公開（公告）號： | CN109971839A | 公開（公告）日： | 2019-07-05 |
| 發(fā)明（設計）人： | 閆志凌;徐開林;張煥新;孫乾;扈臣媛;韓雅慧;牛銘山 | 申請（專利權）人： | 閆志凌 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 周宇 |
| 地址： | 221000 江蘇省徐州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 數(shù)字PCR 擴增效率 實時熒光定量PCR 分子生物技術 檢測結果 小液滴 校準物 引物 申請 | ||
1.數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述數(shù)字PCR方法包括以下步驟：
根據(jù)待檢基因設計得到檢測引物；
提取待檢樣本的基因組DNA并進行處理，得到DNA模板并對待檢含量進行定量分析，稀釋至目標濃度，得到模板稀釋液；
將所述模板稀釋液、所述檢測引物與探針、數(shù)字PCR反應緩沖液混合，制備得到數(shù)字PCR反應混合液；
將所述數(shù)字PCR反應混合液分散到多個反應單元中，利用密封劑和密封液密封所述多個反應單元，進行數(shù)字PCR擴增反應；
讀取所述多個反應單元的數(shù)據(jù)并分析所述數(shù)字PCR擴增反應的結果。
2.如權利要求1所述的數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述稀釋的倍數(shù)為10-100倍。
3.如權利要求1所述的數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述多個反應單元包括至少10000個。
4.如權利要求1所述的數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述PCR反應的總體系為15μL，包括正向引物和反向引物各0.25μL、探針0.25μL、反應mix溶液7.5μL，模板稀釋液3μL，ddH2O補足至15μL。
5.如權利要求1所述的數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述密封液的用量為220-250μL。
6.如權利要求1所述的數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述PCR反應的程序為95℃，10min；95℃，30s；50循環(huán)；50-55℃，60s；95℃，10min。
7.如權利要求6所述的數(shù)字PCR的實驗方法，其特征在于，所述PCR反應的程序中的溫度變化速率為0.8-1.3℃/s。
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