[發(fā)明專利]一種用于區(qū)分結(jié)核桿菌和BCG疫苗的sRNA標(biāo)志物及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910304999.1
• 申請日: 2019-04-16
• 公開（公告）號: CN110093432B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 付英梅;張鳳民;宋武琦;李愛梅;劉鑫一;房勇
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發(fā)明公開了一種用于區(qū)分結(jié)核桿菌和BCG疫苗的sRNA標(biāo)志物及其用途。為了解決結(jié)核桿菌感染和BCG疫苗接種難以區(qū)分的問題，本發(fā)明發(fā)明人首先通過細(xì)菌RNA測序，檢測和篩選結(jié)核分枝桿菌中的sRNA種類，按照本發(fā)明中篩選到的目標(biāo)sRNA序列設(shè)計了能夠檢測結(jié)核桿菌sRNA的特異性引物、試劑盒，并建立了相應(yīng)的實(shí)時熒光定量PCR檢測方法。從細(xì)菌菌體中提取游離sRNA，合成cDNA后，用本發(fā)明的實(shí)時熒光定量PCR法對其含量進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)證明該方法可用于區(qū)別結(jié)核桿菌和BCG疫苗，并且具有敏感性高、特異性好、成本低、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，有望進(jìn)一步滿足臨床以及實(shí)驗(yàn)室對于結(jié)核桿菌和BCG疫苗快速診斷的需要。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于區(qū)分結(jié)核桿菌和BCG疫苗的sRNA標(biāo)志物及其用途，還涉及基于該sRNA標(biāo)志物用于區(qū)分結(jié)核桿菌感染和BCG疫苗接種的引物和試劑盒。本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

結(jié)核桿菌是引起結(jié)核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺結(jié)核最為多見。結(jié)核病是世界性的公共衛(wèi)生學(xué)難題，在傳染性疾病所占的死亡率中排名第一。中國每年死于結(jié)核病的人約25萬之多，是各類傳染病死亡人數(shù)總和的兩倍多。目前中國結(jié)核病防治的重要挑戰(zhàn)是病原學(xué)確診率低、耐多藥結(jié)核病發(fā)現(xiàn)率低。

臨床診斷結(jié)核桿菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)為病原學(xué)檢測，通過病變部位標(biāo)本的抗酸染色和結(jié)核菌培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌。但由于標(biāo)本獲取不易標(biāo)準(zhǔn)化、病變程度對病灶中細(xì)菌含量有影響等因素，抗酸染色和結(jié)核菌培養(yǎng)的陽性率不高，結(jié)核的病原學(xué)檢測確診率全球平均水平是50％，中國尚不足30％，導(dǎo)致很多結(jié)核病的漏診和誤診。

與呼吸道標(biāo)本相比，外周血標(biāo)本更易進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化獲取和操作，從外周血中尋找有效的結(jié)核感染標(biāo)志物，是提高結(jié)核診斷率的一個有效途徑。人體的miRNA有望成為結(jié)核病診斷的外周血核酸標(biāo)志物，但由于人體各種miRNA以網(wǎng)絡(luò)的形式相互作用，其他疾病也會導(dǎo)致miRNA含量的變化，影響診斷的特異性。因此，尋找血液中病原體來源的特異性核酸標(biāo)志物，以反映細(xì)菌在體內(nèi)的活動狀態(tài)，建立特異性診斷結(jié)核病的血液標(biāo)志物檢測體系，有望提高結(jié)核實(shí)驗(yàn)室診斷的特異性。