[發明專利]構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法

在審

• 申請號: 201910304378.3
• 申請日: 2019-04-16
• 公開（公告）號: CN109975378A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 郭振中;稅冰清;陶丹
• 申請（專利權）人: 武漢科技大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法，其特征在于，所述利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法應用電極表面修飾技術，將抗體修飾到電極表面；

適配體通過共價結合組裝在金納米顆粒上；利用抗體與tau蛋白的特異性結合作用將tau蛋白結合到電極表面，并在適配體的作用下增強tau蛋白特異性吸附，構建出適配體-抗體夾心模式的電化學生物傳感器用于檢測阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量。

2.如權利要求1所述的利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法，其特征在于，所述利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的具體包括：

步驟一，電極預處理：利用鋁粉拋光，乙醇和純水超聲清洗電極表面各3分鐘；將電極分別浸入2mol/L的氫氧化鉀溶液、稀釋20倍的濃硫酸和濃硝酸溶液中各15分鐘；在0.5mol/L硫酸溶液中采用循環伏安法對電極進行活化，掃描范圍0.4～1.7V，反復掃描獲取穩定的循環伏安圖；

步驟二，金納米顆粒的制備與表征：在燒杯中加入18mL純水，再分別加入0.01mol/L四氯金酸溶液、0.01mol/L檸檬酸鈉溶液和0.1mol/L硼氫化鈉溶液各0.5mL；攪拌混合呈淡橙色，靜置2小時，制備成金納米顆粒膠體溶液；利用透射電子顯微鏡分析金納米顆粒的形狀、大小，通過表征確定制備的4nm金納米顆粒是否成功；

步驟三，固定抗體：將處理的金電極浸入250mmol/L的3-巰基丙酸乙醇溶液中24小時，再將電極在0.25mol/L EDC和0.05mol/L NHS的磷酸緩沖溶液中活化5小時；將5μL0.05mg/mL tau蛋白抗體滴加至金電極表面，于4℃下干燥12小時；加入1％牛血清白蛋白溶液封閉金電極表面；

步驟四，制備適配體與金納米顆粒的共軛體：將1mL0.03mol/L半胱胺加入10mL金納米顆粒膠體溶液中，于50℃下超聲處理1小時；再加入適配體于室溫孵育4小時，制備成適配體與金納米顆粒共軛體；

步驟五，電化學技術檢測：循環伏安法和差分脈沖伏安法測定tau蛋白含量在CHI660E電化學工作站完成。

3.如權利要求1所述的利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法，其特征在于，構建出適配體-抗體夾心模式的電化學生物傳感器后還需進行樣品采集，用EDTA抗凝管收集空腹靜脈血4～5mL，2小時內進行離心處理取上清液得到血漿樣本，待測，備用；

血漿樣本分裝到冷凍管并儲存于-80℃待測；在測定前，將所有樣品在含有PBS緩沖溶液中以1:100體積比稀釋；離心處理條件為：4℃，15min，3000rpm。

4.如權利要求1所述的利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法，其特征在于，構建出適配體-抗體夾心模式的電化學生物傳感器后，以K₃Fe(CN)₆/K₄Fe(CN)₆作為氧化還原探針進行結果判定，在電解杯中加入K₃Fe(CN)₆/K₄Fe(CN)₆溶液與血液樣本，利用差分脈沖伏安法檢測樣本。

5.一種利用權利要求1所述利用電化學生物傳感器構建阿爾茨海默病血液中tau蛋白含量檢測系統的方法構建的適配體-抗體夾心模式的電化學生物傳感器。