[發明專利]一種基于固相凝集技術的分檢式紅細胞血型不規則抗體檢測試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201910302834.0
• 申請日: 2019-04-16
• 公開（公告）號: CN110174518A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 駱宏;羅廣平
• 申請（專利權）人: 駱宏
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80;G01N33/543
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉媖

本發明涉及一種基于固相凝集技術的分檢式紅細胞血型不規則抗體檢測試劑盒及制備方法，屬試劑盒制備技術領域，該試劑盒包括：（1）分檢式固相凝集反應微板；（2）低離子強度溶液；（3）指示系統；（4）陰性對照血清；（5）陽性對照血清；制備方法包括：（1）分檢式固相凝集反應微板的制備；（2）低離子強度溶液的制備；（3）指示系統的制備；（4）陰性對照血清的制備；（5）陽性對照血清制備；通過創新性的利用單克隆抗體對紅細胞的高特異性吸附、利用冷凍干燥保存技術、利用高靈敏度的二步法指示系統，切實解決目前臨床不規則抗體檢測方法中靈敏度低、紅細胞難以保存、易漏檢等難題，為臨床一線檢測工作提供一種高性價比的檢測試劑盒。

技術領域

本發明涉及一種以固相凝集技術為基礎的分檢式紅細胞血型不規則抗體檢測試劑盒及制備方法，屬于試劑盒制備技術領域。

背景技術

紅細胞血型系統不規則抗體是指在人體內除了抗-A和抗-B以外的血型抗體。人紅細胞除了ABO抗原外，常見的抗原還有D、C、E、c、e、JK^a、JK^b、M、N、S、s、Fy^a、Fy^b、Lu^b等。相應的，針對這些抗原所產生的抗體屬于不規則抗體范疇。

不規則抗體多數屬于免疫性抗體，其產生途徑主要有：輸血、妊娠、接觸天然免疫性抗原物質等。這些抗體以IgG型為主。對于受血者而言，體內存在不規則抗體時，一旦輸入對應抗原陽性的紅細胞，輕則引起溶血性輸血反應，重則危及患者的生命安全；對于獻血者而言，如果其體內含有不規則抗體，該抗體一旦被輸入含有相應抗原的受血者，同樣容易引起輸血反應甚至危及生命；對于孕產婦而言，IgG型的不規則抗體透過胎盤進入胎兒體內，則可引發胎兒/新生兒溶血病。因此，國家衛計委在《臨床輸血技術規范》中，明確規定輸血前檢查必須包括不規則抗體篩檢試驗，以降低受血者發生輸血反應的風險；在臨床產科實踐中，也在不斷的強化對多次妊娠的孕婦，將不規則抗體的篩查作為孕期保健的常規檢測，以降低胎兒/新生兒發生溶血病的風險。

目前國內各級醫療機構和采供血機構檢測不規則抗體的方法主要是試管法和抗人球蛋白微柱凝膠卡法。試管法主要基于IgM型抗體與相應抗原在鹽水介質中的反應進行試驗，但不能檢出IgG型的不規則抗體。且試管法需要手動振搖觀察，容易受操作者個人經驗的影響，導致結果判讀差異較大。因此，近年來，抗人球蛋白微柱凝膠卡法得到了廣泛的應用。其原理主要是利用凝膠介質的分子篩作用，將凝膠顆粒懸浮在緩沖液中，灌入微柱卡中制得。實驗時，在反應腔中分別加入抗篩細胞和待檢血清，孵育一定時間后，再離心觀察結果。如果受檢標本含有不規則抗體，則形成的凝集塊不能通過凝膠柱的分子篩而滯留在凝膠柱的上層或分散于柱中；若受檢血清中無不規則抗體，離心后游離的試劑紅細胞可以通過分子篩而沉積在微柱的底部。該方法受試劑紅細胞濃度、離心力和離心時間、凝膠粒徑大小、懸浮介質中抗凝劑濃度等因素影響，檢測的靈敏度容易受到影響，如Kidd血型系統抗體和中國人群的高頻不規則抗體抗-Mur等具有劑量效應的抗體，用微柱凝膠卡法檢驗時，容易漏檢造成輸血反應[Brian Kay,Jessica L.Poisson,Chirstopher W.Tuma,等.Anti-JK^a that are detected by solid-phase red blood cell adherence but missed bygel testing can cause hemolytic transfusion reactions.Transfusion,2016,56:2973-2979.]。另一方面，微柱凝膠卡價格相對較高，需要配套的孵育和離心設備，限制了其在多數醫療機構的應用。