[發(fā)明專利]Y染色體微缺失檢測(cè)的擴(kuò)增組合物及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910301927.1
• 申請(qǐng)日: 2019-04-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109957616B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 智慧芳;佟洪梅;趙方圓;倪君君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京雙收知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11241
• 代理人: 李厚銘

1.一種Y染色體微缺失檢測(cè)的擴(kuò)增組合物，其特征在于，包括以下引物組合：

（1）用于擴(kuò)增Y染色體AZFa區(qū)sY84位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

sY84-F：5'- TTTCAGCAAAGAGAAGGGTCC -3'

sY84-R：5'- TCTGAAGCCTACTACCTGGAG-3'；如序列表中SEQ ID NO:1-2所示；

（2）用于擴(kuò)增Y染色體AZFa區(qū)sY86位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

sY86-F：5'- GGGAGAAGACAGCATCTACAAC -3'

sY86-R：5'- GCAGGACAGAGACTTGGTAATG -3'；如序列表中SEQ ID NO:3-4所示；

（3）用于擴(kuò)增Y染色體AZFb區(qū)sY127位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

sY127-F ：5'- CTGCAGGCAGTAATAAGGGA -3'

sY127-R ：5'- CCACTGGAATCTACCAAAGC -3'；如序列表中SEQ ID NO:5-6所示；

（4）用于擴(kuò)增Y染色體AZFb區(qū)sY134位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

sY134-F ：5'- GTCTGCCTCACCATAAAACG -3'

sY134-R ：5'- ACCACTGCCAAAACTTTCAA -3'；如序列表中SEQ ID NO:7-8所示；

（5）用于擴(kuò)增Y染色體AZFc區(qū)sY254位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

sY254-F ：5'- GGGTGTTACCAGAAGGCAAA -3'

sY254-R ：5'- GAACCGTATCTACCAAAGCAGC -3'；如序列表中SEQ ID NO:9-10所示；

（6）用于擴(kuò)增Y染色體AZFc區(qū)sY255位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

sY255-F ：5'- GTTACAGGATTCGGCGTGAT -3'

sY255-R ：5'- CTCGTCATGTGCAGCCAC -3'；如序列表中SEQ ID NO:11-12所示；

（7）用于擴(kuò)增Y染色體短臂SRY位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

SRY-F ：5'- GAATATTCCCGCTCTCCGGA -3'

SRY-R ：5'- GCTGGTGCTCCATTCTTGAG -3'；如序列表中SEQ ID NO:13-14所示；

（8）用于擴(kuò)增ZFX/ZFY位點(diǎn)的引物對(duì)，其堿基序列為：

ZFX/ZFY-F ：5'- GGACATCCTTTGACTGTCTATC -3'

ZFX/ZFY-R ：5'- GGGTAGTCTTTCGTGTGAAC -3'；如序列表中SEQ ID NO:15-16所示；

設(shè)有2個(gè)引物組；其中，引物組A包含（1）、（3）、（6）、（7）、（8）引物對(duì)；引物組B包含（2）、（4）、（5）、（7）、（8）引物對(duì)；

2個(gè)引物組中各引物對(duì)的摩爾比為，

A組：sY84：sY127：sY255：SRY：ZFX/ZFY=（0.8-2）：（0.8-2）：（0.8-2）：（0.8-2）：（0.8-2）；

B組：sY86：sY134：sY254：SRY：ZFX/ZFY=（0.8-2）：（0.8-2）：（0.8-2）：（0.8-2）：（0.8-2）。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Y染色體微缺失檢測(cè)的擴(kuò)增組合物，其特征在于：還包括Y染色體微缺失檢測(cè)的擴(kuò)增反應(yīng)體系，所述的反應(yīng)體系包括任一項(xiàng)的引物組合物、DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液、dNTP和模板DNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Y染色體微缺失檢測(cè)的擴(kuò)增組合物，其特征在于，所述擴(kuò)增反應(yīng)體系為：引物濃度為50-300nM，DNA聚合酶用量0.5-2.0U，PCR反應(yīng)緩沖液為2*，dNTP濃度為200-500μM，模板DNA用量10-100ng。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的Y染色體微缺失檢測(cè)的擴(kuò)增組合物，其特征在于：所述的DNA聚合酶為多重PCR專用熱啟動(dòng)DNA聚合酶。