[發明專利]可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法

在審

• 申請號: 201910301767.0
• 申請日: 2019-04-16
• 公開（公告）號: CN110004221A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 趙方圓;佟洪梅;智慧芳;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 李厚銘

1.一種可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于，所述4個SNP位點具體為ADH2基因的突變位點rs1229984，ALDH2基因的突變位點rs671，GABRA2基因的突變位點rs279858及rs279826；包括以下步驟：

(1)根據4個SNP位點的上下游序列分別設計上游引物、下游引物；

(2)配置多重PCR反應體系；

(3)PCR擴增。

2.根據權利要求1所述的可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中的引物包括：

上游引物序列ADH2-F：GCCTGAGTGTGAATCCTGTACCTGGTTTG；

下游引物序列ADH2-R：CGGGAAGGTAGAGAAGGGCTTTAGACTGAATA；

上游引物序列ALDH2-F：GGACAGAGCAGAGGCTGGGTCTTTAC；

下游引物序列ALDH2-R：TCAGGTCCTGGGAGTGTAACCCATAACC；

上游引物序列GABRA2-826F：CGAGCTGCAGTGTTTGGATTAGCCCTATG；

下游引物序列GABRA2-826R：GGTCCAAGGCAATCACTTTGCTCAATACC；

上游引物序列GABRA2-858F：CCATGGTATACAGCAGAGTCCCATCATC；

下游引物序列GABRA2-858R：GCCAGGTCCTATGAATATCCTTCGACTAAA；

如序列表中SEQ ID NO:1-8所示。

3.根據權利要求2所述的可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于，步驟(2)中多重PCR體系條件為：緩沖液為2×，4種dNTP的終濃度為400-500μM，DNA聚合酶的用量為1-5U，4對引物種每條引物的濃度為60-100nM。

4.根據權利要求3所述的可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于：步驟(3)中多重PCR擴增的條件為94℃30s-5min；98℃5-30s，50-66℃40s，68℃5-180s，20-40個循環；68℃0-20min。

5.根據權利要求1-4任一所述的可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于：所檢測的材料為人類基因組DNA，選用手工提取或試劑盒提取方法對來源的樣本進行提取處理得到的DNA；所述的來源樣本包括含有人類基因組DNA的人類的血液、組織、口腔拭子樣本。

6.根據權利要求5所述的可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于：待測DNA樣本的制備方法包括如下步驟：用口腔拭子收集的口腔脫落細胞或收集的新鮮外周血樣本采用天根口腔拭子基因組DNA提取試劑盒或血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，并采用NP80-touch測定DNA的濃度及純度，然后保存基因組DNA。

7.根據權利要求1-4任一所述的可同步檢測3個酒精代謝基因4個SNP位點的多重PCR檢測方法，其特征在于：進行多重PCR擴增反應時，四個基因同時在一個擴增體系中進行，同時擴增ADH2：rs1229984；ALDH2：rs671；GABRA2：rs279858和rs279826共計4個酒精代謝基因SNP位點。