[發明專利]擴增骨髓間充質干細胞的方法、培養基及應用

在審

• 申請號: 201910299284.1
• 申請日: 2019-04-15
• 公開（公告）號: CN110172445A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 周軍年;裴雪濤;黃媛媛;岳文;周月環
• 申請（專利權）人: 華南生物醫藥研究院;中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明生物工程技術領域，具體涉及一種擴增骨髓間充質干細胞的方法、培養基及其應用。該擴增骨髓間充質干細胞的方法包括利用bFGF和VEGF處理所述骨髓間充質干細胞，以便擴增所述骨髓間充質干細胞。該培養基中添加有bFGF和VEGF。利用本發明所提供的方法所培養的骨髓間充質干細胞不僅能使細胞的增殖能力增加，保持細胞的生物特性和功能，而且能夠提高細胞表面分子CD105的表達率，從而可以用于移植治療急性心肌梗死、慢性心肌梗死以及心臟衰竭引起的缺血性心臟病。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種擴增骨髓間充質干細胞的方法、培養基及應用。

背景技術

骨髓間充質干細胞(bone-marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是存在于骨髓中的一群異質性細胞，它具有自我更新能力和多向分化的潛能，可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、心肌細胞、脂肪細胞、內皮細胞等，并能形成多種結締組織，如骨骼肌、肌腱、韌帶、真皮、脂肪和骨髓基質等，在組織再生、創傷修復以及多種疾病的治療中都有著巨大的潛力。

BMSCs是目前研究較為深入的一類成體干細胞。體外培養的BMSCs在形態上呈梭形或紡錘形，生長方式一般為漩渦狀、魚群樣生長。多項研究表明，體外分離得到的BMSC是多種細胞混雜的細胞群，其表面抗原也不具有均一性，它能夠表達表皮干細胞、內皮細胞、間充質干細胞的表面標志物，如CD166,CD54,CD102,CD44,CD106等，還表達CD90,CD105等。但不表達造血干細胞的表面標志物，如CD34,CD45,CD14,CD3,CD4,CD8等，也不表達主要組織相容性復合物類分子，如HLA-DR抗原等。

CD105是一種內皮細胞增殖的標志物為間充質干細胞的特征性表型，也是轉化生長因子β(TGFβ)受體復合物的成分之一，與TGF-β1有較高的親和力，可與TGF-β受體I組成功能性的受體復合物，參與調節細胞的增值與分化。TGF-β在體外可以抑制內皮細胞的生長，而在體內卻可通過結合炎癥細胞誘導其釋放血管生成因子刺激內皮細胞分裂增殖。研究表明CD105在活性血管生成區高表達，因此，CD105不僅調節細胞對TGF-β的反應，也促進血管的形成。

目前在對BMSCs的基礎研究與臨床應用研究中，都需要大量的具有良好生物活性和功能的細胞。然而，BMSCs在骨髓內的含量很少，且隨著供者年齡的增長，BMSCs在體內的數量逐漸減少，在體外的常規培養過程中出現增殖能力下降，生物活性及功能變差的狀況，這在一定程度上限制了對BMSCs更深入的研究與臨床應用。

因此，需要一種新的體外培養方法以獲得足量的、生物特性和功能都更好的BMSCs。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種擴增骨髓間充質干細胞的方法、培養基及其應用。

本發明的目的是提供了一種快速地分離、擴增骨髓間充質干細胞并獲得活性高、狀態佳的骨髓間充質干細胞的新方法，即一種經培養基中添加bFGF和VEGF兩個因子聯合處理來擴增骨髓間充質干細胞的新方法。

具體而言，本發明提供了如下技術方案：