[發(fā)明專利]擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法、培養(yǎng)基及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910299284.1
• 申請(qǐng)日: 2019-04-15
• 公開（公告）號(hào): CN110172445A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周軍年;裴雪濤;黃媛媛;岳文;周月環(huán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南生物醫(yī)藥研究院;中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括：

利用bFGF和VEGF處理所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，以便擴(kuò)增所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述bFGF的濃度為1～50ng/mL，任選為2～20ng/mL，例如為5ng/mL，

所述VEGF的濃度為1～50ng/mL，任選為2～20ng/mL，例如為5ng/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，利用含有bFGF和VEGF的培養(yǎng)基培養(yǎng)所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，以便擴(kuò)增所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；

任選地，所述培養(yǎng)是在溫度為36～38攝氏度，CO₂的體積濃度為4.5～5.5％、常氧條件下進(jìn)行的；

任選地，所述培養(yǎng)基進(jìn)一步包括：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS和谷氨酰胺；

任選地，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基選自α-MEM、LDMEM培養(yǎng)基、RPMI 1640培養(yǎng)基中的至少一種；

任選地，所述谷氨酰胺是以水溶液的形式提供的，所述谷氨酰胺的水溶液中，所述谷氨酰胺的濃度為200mM/L，基于所述培養(yǎng)基的總體積，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積分?jǐn)?shù)為89％，所述FBS的體積分?jǐn)?shù)為10％，所述谷氨酰胺的水溶液的體積分?jǐn)?shù)為1％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為P5代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，所述P5代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是通過將原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行接種和預(yù)擴(kuò)增處理后獲得的第五代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；

任選地，用于所述接種和預(yù)擴(kuò)增處理的培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、青鏈霉素和FBS。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，經(jīng)擴(kuò)增的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞密度達(dá)到85％-95％時(shí)，所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子CD105的表達(dá)率大于50％。

6.一種擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括：

將原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行接種處理，以便獲得第五代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，所述原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的接種密度為2×10⁵/cm²；

在溫度為37攝氏度，CO₂體積濃度為5％，常氧條件下，將所述第五代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在含有bFGF和VEGF的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以便擴(kuò)增所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；

其中所述培養(yǎng)基由α-MEM、FBS和谷氨酰胺水溶液制備而成，所述谷氨酰胺水溶液中，所述谷氨酰胺的濃度為200mM/L，基于所述培養(yǎng)基的總體積，所述α-MEM的體積分?jǐn)?shù)為89％，所述FBS的體積分?jǐn)?shù)為10％，所述谷氨酰胺水溶液的體積分?jǐn)?shù)為1％。

7.一種擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的系統(tǒng)，其特征在于，包括：

接種裝置，所述接種裝置用于將原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行接種處理；

預(yù)擴(kuò)增處理裝置，所述預(yù)擴(kuò)增處理裝置與所述接種裝置相連，所述預(yù)擴(kuò)增處理裝置用于將所述接種處理后的所述原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增處理，以便獲得第五代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；

擴(kuò)增處理裝置，所述擴(kuò)增處理裝置與所述預(yù)擴(kuò)增處理裝置相連，所述擴(kuò)增處理裝置利用bFGF和VEGF處理所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，以便擴(kuò)增所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。