[發明專利]一種玉米赤霉烯酮降解酶及其應用

有效

• 申請號: 201910298924.7
• 申請日: 2019-04-15
• 公開（公告）號: CN110029095B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 黃和;盧丹;徐晴;張立慧;馮小倩
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/55;C12N15/70
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓;尹妍

1.一種玉米赤霉烯酮降解酶在玉米赤霉烯酮降解中的應用，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，編碼所述玉米赤霉烯酮降解酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，包括如下步驟：

(1)構建包含玉米赤霉烯酮降解酶基因的重組菌；

(2)誘導表達重組菌，獲得重組表達的玉米赤霉烯酮降解酶粗酶液；

(3)純化粗酶液，獲得純酶液；

(4)將純酶液和含玉米赤霉烯酮溶液混合，進行降解反應；反應條件為30～40℃，pH 5～10，10～20min。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中，重組菌構建方式為：PCR擴增玉米赤霉烯酮降解酶基因，獲得PCR產物；用NdeI和XhoI分別雙酶切PCR產物和pET-30a(+)載體，將酶切后的PCR產物純化，并用T4DNA連接酶連接到pET-30a(+)載體中，獲得重組載體pET-30a(+)-LD08，將重組載體轉入感受態大腸桿菌E.coLiBL21(DE3)中，涂布于固體LB培養基上培養，挑取單菌落，接種于含硫酸卡那霉素的LB液體培養基中，篩選陽性轉化子，即為重組菌。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述步驟(2)中，粗酶液誘導表達方法為：用含硫酸卡那霉素的LB培養基培養重組菌，OD600值達到0.6后，添加IPTG繼續培養后，將液體培養物離心，棄上清，得到重組菌沉淀物；使用磷酸鹽緩沖液重新懸浮菌體，超聲波細胞破碎儀對細胞進行破碎，離心，除去細胞殘渣，收集上清液，即為重組表達的粗酶液。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，將粗酶液置于冰上，根據表達出的重組酶含有His-tag標簽，利用Ni柱進行親和層析純化，緩沖液洗脫收集目的蛋白，以獲得純化的酶液。