[發明專利]定性和/或定量檢測鼠李糖乳桿菌的特異性引物、試劑盒和方法在審
| 申請號： | 201910297977.7 | 申請日： | 2019-04-15 |
| 公開（公告）號： | CN109943655A | 公開（公告）日： | 2019-06-28 |
| 發明（設計）人： | 鐘智;張和平;孫志宏;李偉程;高旭 | 申請（專利權）人： | 內蒙古農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/225 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 代芳 |
| 地址： | 010000 內蒙古*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 特異性引物 鼠李糖乳桿菌 定量檢測 定性 上游引物 下游引物 試劑盒 基因工程技術 靈敏度 | ||
1.用于定性和/或定量檢測鼠李糖乳桿菌M9的特異性引物，其特征在于，所述特異性引物包括上游引物M9F和下游引物M9R；所述上游引物M9F的序列如SEQ ID NO.1所示；下游引物M9R的序列如SEQ ID NO.2所示。
2.基于權利要求1所述特異性引物的定性和/或定量檢測鼠李糖乳桿菌M9的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的特異性引物。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：標準品和PCR體系。
4.基于權利要求1所述特異性引物或權利要求2或3所述試劑盒的定性檢測鼠李糖乳桿菌M9的方法，包括以下步驟：
1)提取待檢測樣品的DNA片段，作為模板DNA；
2)利用所述特異性引物對步驟1)得到的模板DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；
3)對步驟2)得到的PCR擴增產物進行凝膠電泳檢測，263bp處出現單一條帶，說明待檢測樣品中含鼠李糖乳桿菌M9。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟2)所述PCR擴增的條件為：94℃變性5min；94℃變性1min，54℃退火53s，72℃延伸2min，循環30次；72℃延伸7min。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟3)所述凝膠電泳檢測的條件為：電壓為5V/cm，電泳時間為20～30min。
7.基于權利要求1所述特異性引物或權利要求2或3所述試劑盒的定量檢測鼠李糖乳桿菌M9的方法，包括以下步驟：
(1)提取待檢測樣品的DNA片段，作為模板DNA；
(2)利用所述特異性引物對步驟(1)得到的模板DNA進行微滴生成，得到微滴；
(3)對步驟(2)得到的微滴進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；
(4)對步驟(3)得到的PCR擴增產物進行定量檢測。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述微滴生成為利用ddPCR系統使模板DNA形成油包水結構。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述PCR擴增的條件為95℃變性10min；94℃變性30s，54℃退火1min，循環30次；4℃延伸5min，90℃延伸5min。
10.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述定量檢測為采用微滴分析儀進行檢測，所述微滴分析儀的檢測條件包括染料法或探針法。
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