[發明專利]一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 201910297054.1
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN110057950B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 劉婷;王瓊芬;張夢奇;徐虹;石婧
• 申請（專利權）人: 舟山市食品藥品檢驗檢測研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，吸取蒲地藍消炎片供試品溶液注入液相色譜儀進行高效液相色譜分析，經多點校正和全譜峰匹配，采用平均數法生成蒲地藍消炎片對照指紋圖譜；結合對照指紋圖譜和對照品的紫外光譜圖，在對照指紋圖譜中指認了其中7個共有峰對應的成分：保留時間為2.713min、23.246min、28.072min、28.647min、30.668min、34.288min、35.391min的峰分別是單咖啡酰酒石酸、黃芩苷、千層紙素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A；

所述高效液相色譜的色譜條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的AgilentPoroshell 120 SB-C18為色譜柱，所述色譜柱的規格為2.1 mm×50mm，2.7μm；檢測波長為0～10min 323nm，10～40min 280nm；以甲醇為流動相A、乙腈為流動相B、0.1%磷酸溶液為流動相C，進行梯度洗脫，洗脫程序如下：

0-5min，流動相A 10?20%、流動相B 5%、流動相C 85?75%；

5-20min，流動相A 20?25%、流動相B 5?10%、流動相C 75?65%；

20-30min，流動相A 25?40%、流動相B 10?15%、流動相C 65?45%；

30-40min，流動相A 40%、流動相B 15%、流動相C 45%。

2.根據權利要求1所述的一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：取蒲地藍消炎片，除去包衣，研細，置具塞錐形瓶中，加入提取溶劑，密塞，稱定重量，加熱回流，取出，放冷，再稱定重量，用提取溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

（2）對照品溶液的制備：取單咖啡酰酒石酸、黃芩苷、千層紙素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A對照品，用甲醇制成混合對照品溶液；

（3）HPLC測定：分別吸取對照品溶液和供試品溶液各2μL，注入高效液相色譜儀，記錄對照品和樣品色譜圖，測得的色譜圖即為樣品指紋圖譜；

（4）蒲地藍消炎片對照指紋圖譜的建立：取若干家不同企業的蒲地藍消炎片各1批，分別按步驟（1）供試品制備方法制得供試品溶液，進樣，測得該樣品的指紋圖譜，導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜評價系統”2012.130723版軟件，經多點校正和全譜峰匹配，采用平均數法生成蒲地藍消炎片對照指紋圖譜；

（5）樣品指紋圖譜相似度評價：測定各樣品的指紋圖譜，以對照指紋圖譜為參比，采用步驟（4）的評價軟件，對樣品進行相似度評價。

3.根據權利要求1或2所述的一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，高效液相色譜法的色譜條件：流速：0.3ml/min；柱溫：30℃。

4.根據權利要求1或2所述的一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，波長切換時間選為黃芩苷峰保留時間前10分鐘。

5.根據權利要求2所述的一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法其特征在于，步驟（1）中加熱回流方法能有效抑制酶的活性，在85℃回流溫度下，黃芩酶全部滅活，加熱回流時間為2h。

6.根據權利要求2所述的一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟（1）中供試品提取溶劑為50%甲醇。

7.根據權利要求2所述的一種基于檢測波長切換的蒲地藍消炎片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟（5）樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度應大于0.95。