[發明專利]一種鑒定動物體內NAB代謝產物的方法和評價NAB在動物體內暴露風險的方法

有效

• 申請號: 201910296030.4
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109991355B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 張建勛;毛健;劉帥東;柴國璧;張啟東;曹保軍;李琛;王榮浩;王丁眾;張文娟;席輝;宋瑜冰;屈展
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 郭佳效

本發明涉及一種鑒定動物體內NAB代謝產物的方法和評價NAB在動物體內暴露風險的方法。評價NAB暴露風險的方法包括：1)將動物血液樣品進行離心，取上清液，向上清液中加入乙腈混合均勻后靜置，得到混合樣品；2)將混合樣品進行離心，取上清液，固液分離，將所得液體進行超高效液相色譜串聯軌道阱高分辨質譜檢測；3)將分子量測量值與NAB的代謝產物的理論分子量相比對，依據比對結果，鑒定動物體內NAB的代謝產物；4)計算NAB及其代謝產物的AUC值，根據AUC值計算α?羥基化系數，預測NAB對動物體的暴露風險。該方法可以為NAB在動物體內的代謝規律研究提供有效支撐，進而為評價NAB的潛在暴露風險提供量化指標。

技術領域

本發明屬于動物體內煙草特有亞硝胺的代謝分析領域，具體涉及一種鑒定動物體內NAB代謝產物的方法和評價NAB在動物體內暴露風險的方法。

背景技術

煙草中的一些有害成分，特別是具有致癌作用的煙草特有亞硝胺(TSNAs)，一直是吸煙與健康問題研究的熱點。TSNAs是一類僅存在于煙草及煙氣中的氮亞硝胺類化合物，是在煙草調制和發酵過程中由煙草生物堿通過亞硝化作用而形成的。目前已鑒別出8種TSNAs，研究者關注較多的是含量較高的4種常見的亞硝胺，即N-亞硝基降煙堿(NNN)、N-亞硝基新煙草堿(NAT)、N-亞硝基假木賊堿(NAB)和4-(甲基亞硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)。TSNAs屬于器官特異性致癌物質，可誘導實驗動物產生多種癌癥。目前認為，TSNAs的致癌作用是通過在生物體內的代謝活化而產生，因此研究TSNAs在生物體內的代謝歷程顯得尤為必要。

由于NNN和NNK的致癌性最強，被國際癌癥研究中心(IARC)列為Ⅰ類人體致癌物質，與肺癌、胰腺癌、食道癌等癌癥的發生有關，因此相關的研究較多，而且二者的代謝途徑也較為清楚。NNN和NNK在生物體內主要通過三條途徑進行代謝，其中NNK的代謝途徑有羰基還原、吡啶-N-氧化和α-羥基化，NNN的代謝途徑則為吡啶-N-氧化，吡啶環的羥基化和去甲基可替寧的形成。雖然NAB與NNK或NNN相比，具有相對較弱的毒性，但是在小鼠試驗中發現，NAB和NNN對肺癌有相同的誘導作用。NAB總劑量達到100μmol時，飼喂30周后有90％的小鼠發現腫瘤，而對照組只有27％(Amin S,Desai D,Hecht S S,Hoffmann D.Synthesis oftobacco-specific N-nitrosamines and their metabolites and results of relatedbioassays[J].Critical reviews in toxicology,1996,26(2):139-147.)。然而，目前對NAB的代謝產物尚不清楚，在人體在尿液中，NAB的主要代謝物僅鑒定出有NAB-N-氧化物和NAB的吡啶-N-葡萄糖苷酸。因此，通過合適的手段對NAB的代謝途徑進行鑒定分析對于研究NAB的毒性機理具有重大意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鑒定動物體內NAB代謝產物的方法，以解決現有方法不能確定動物體內NAB的代謝產物的問題。

本發明的第二個目的在于提供一種評價NAB在動物體內暴露風險的方法，以解決現有方法不能對NAB的暴露風險進行有效評價的問題。

為實現上述目的，本發明的鑒定動物體內NAB代謝產物的方法所采用的技術方案是：

一種鑒定動物體內NAB代謝產物的方法，包括以下步驟：

1)將動物血液樣品進行離心，取上清液，向上清液中加入乙腈混合均勻后靜置，得到混合樣品；

2)將混合樣品進行離心，取上清液，固液分離，將所得液體進行超高效液相色譜串聯軌道阱高分辨質譜檢測；

3)將步驟2)檢測得到的分子量測量值與NAB的代謝產物的理論分子量相比對，依據比對結果，鑒定動物體內NAB的代謝產物；所述NAB的代謝產物為NAB-N-oxide，5-羰基-5-(3-吡啶基)-戊酸和5-羥基-5-(3-吡啶基)-戊酸。