[發明專利]一種可用于犬肝簇蟲檢測的引物及試劑盒

在審

• 申請號: 201910295762.1
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109913568A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 王錦明;關貴全;劉軍龍;牛慶麗;高閃電;李有全;劉愛紅;劉志杰;殷宏;羅建勛;劉光遠;楊吉飛;任巧云;田占成;陳澤;獨軍政
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6893
• 分類號: C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12Q1/6804;C12N15/11
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.一對可用于檢測犬肝簇蟲的外圍置換引物，其基因序列為：SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2。

2.與權利要求1所述引物配合使用的用于檢測犬肝簇蟲的交叉引物和探針引物，其序列為：交叉引物序列為SEQ ID No.3，兩條探針引物的序列分別為SEQ ID No.4和SEQ IDNo.5。

3.一種犬肝簇蟲檢測試劑盒，其特征在于盒內至少包含有引物SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3，用FITC標記的探針引物SEQ ID No.4和用生物素標記的探針引物SEQID No.5，以及免疫層析試紙條。

4.根據權利要求3所述的犬肝簇蟲檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括恒溫擴增所需的常規試劑：10×Isothermal Amplification Buffer、100mM MgSO₄、2.5mM dNTPmix，Bst DNA聚合酶。

5.權利要求3或4所述的試劑盒用于非疾病診斷目的檢測方法，其特征在于：以提取的待檢樣品的基因組DNA為模板，用試劑盒內的引物進行擴增，將擴增產物滴加至免疫層析試紙條，隨后將試紙條置于含有層析緩沖液的微孔板中，根據試紙條上的質控線和檢測線顯色情況確定被檢樣品是否感染犬肝簇蟲。

6.根據權利要求5所述的用于非疾病診斷目的檢測方法，其特征在于所建立的反應體系包括：10×Isothermal Amplification Buffer 2.5μL，100mM MgSO₄ 1.5μL，2.5mM dNTPmix 8μL，Bst DNA聚合酶8U，10μM交叉引物Hcanis-2a1s 1.25μL，10μM置換引物Hcanis-5a、Hcanis-4s各0.2μL，10μΜ FITC標記的探針Hcanis-2a 0.8μL和生物素標記的探針10μΜHcanis-3a 0.8μL，被檢DNA 1μL，加入ddH₂O補足25μL；

所述擴增的反應條件為：61℃，80min；80℃，2min。