[發明專利]一種感音神經性耳聾致病基因GJB2突變檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201910294871.1
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109825577A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 查定軍;王淑娟;陳俊;梁鵬飛;王劍;李瓊;安曉剛;李薇;邱建華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種感音神經性耳聾致病基因GJB2突變檢測試劑盒。試劑盒包括從待測樣品中提取DNA的試劑、用于擴增樣本DNA的PCR反應試劑、對PCR擴增產物進行測序的試劑；所述擴增樣本DNA的PCR反應試劑包括PCR引物。使用本發明所述試劑盒檢測患者是否存在GJB2基因c.2T>G突變，從而診斷感音神經性耳聾發生的原因，該試劑盒將有利于臨床上開展感音神經性耳聾患者的GJB2突變篩查工作，為感音神經性耳聾患者的診斷提供依據。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，具體涉及在臨床診斷感音神經性耳聾中應用的GJB2基因單個突變位點c.2T>G(p.M1R)分型檢測試劑盒。

背景技術

GJB2基因是最常見的耳聾基因。GJB2基因編碼的Cx26屬于縫隙連接蛋白基因家族，該基因于1993年被克隆，定位于13q11-12。1997年有學者發現GJB2基因突變與遺傳性非綜合征型耳聾密切相關。GJB2基因編碼的Cx26與相鄰細胞的縫隙連接蛋白組成一個完整的縫隙連接通道，該通道對信號傳導和物質交換起著重要作用，也是電解質、第二信使和代謝產物的細胞間轉換的重要通道，耳蝸毛細胞和耳蝸內淋巴液的鉀離子循環受上述縫隙連接通道調控。鉀離子通過縫隙連接通道進入血管紋，由中間細胞釋放進入血管紋間隙，在此處返回內淋巴。致聾原因可能是GJB2基因編碼區的突變導致蛋白質翻譯出現截短蛋白，產生無功能的蛋白質，影響縫隙連接蛋白的結構，從而影響上述通道的正常開閉；也可能產生非截短突變，不影響蛋白的表達，但會影響縫隙連接蛋白的通透性；縫隙連接通道的異常，可導致鉀離子回流內淋巴液的循環受到影響，鉀離子濃度發生改變，達到一定濃度會導致鉀中毒，耳蝸毛細胞損傷，導致感音神經性耳聾，而且大多數人表現為先天性耳聾，且多表現為重度或極重度感音性耳聾。

研究表明，在常染色體隱性遺傳性非綜合征型耳聾患者中，約有50％為GJB2基因突變引起。對于感音神經性耳聾患者GJB2基因突變的篩查，國內外已經廣泛開展，報道的致病突變位點超過100個，包括錯義突變、框移突變、無義突變及剪接位點突變，主要分布在編碼區范圍內。GJB2基因具有明顯的異質性，不同種族其突變形式不完全相同，突變熱點存在種族差異，據統計在中國耳聾患者中21％為GJB2基因突變所致，最常見的突變方式為233～235delC。據800例人工耳蝸植入患者統計，發現191例GJB2基因突變，檢出率約23.88％。

GJB2基因在先天性耳聾遺傳因素中占主導地位，GJB2基因突變的發現，不僅會促進該病的發病機理等基礎研究的發展，還將大大促進感音神經性耳聾的基因診斷和治療的開展。臨床分子診斷可以提供準確的表型預測，特別是對新生兒的基因型篩查，可以對聽力狀況進行及早診斷以便早期干預。通過產前診斷篩查及新生兒GJB2基因突變的普遍篩查，可以降低感音神經性耳聾患兒的出生率，預防耳聾出生缺陷、實現耳聾的有效預防和低成本治療，從而降低耳聾發生率、提高患者生存質量。

GJB2基因是常見的耳聾基因，但它的各個位點突變后的效果是不同的，有些位點突變后是多態，有些位點突變后是隱性遺傳，有些位點突變后是顯性遺傳，有些位點突變成不同的堿基都會是不同的遺傳方式。所以雖然患者可能都是GJB2基因突變引起的耳聾，還是要區分是哪個位點發生了突變，是顯性或隱性，從而為后期該患者家庭中的產前診斷提供依據。

由于GJB2基因的突變種類多樣，每個位點變異后對蛋白的功能影響不同，增加了明確新的突變位點致病性的難度。目前尚未見關于GJB2基因c.2T>G(p.M1R)突變的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種感音神經性耳聾致病基因GJB2突變檢測試劑盒。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種用于檢測GJB2基因c.2T>G(p.M1R)突變的試劑盒，該試劑盒包括用于擴增DNA片段的PCR反應試劑，所述PCR反應試劑包括PCR引物，該PCR引物擴增的目標片段包含人GJB2基因CDS區(參考序列基因ID：2706)第2位所對應的堿基。