[發(fā)明專利]一種雪蚤抗凍蛋白SF-P的制備方法及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910292940.5 | 申請(qǐng)日： | 2019-04-12 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110055257B | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳金鴻;吳喬羽;楊丹璐;于穎;顧欣哲;龔盛祥;汪少蕓;王正武 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/12 | 分類號(hào)： | C12N15/12;C07K14/435;C12N15/70;A23L3/3526;C12N1/04;A01N1/02 |
| 代理公司： | 上海旭誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31220 | 代理人： | 鄭立 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 雪蚤抗凍 蛋白 sf 制備 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種重組雪蚤抗凍肽SF-P的制備方法制備的重組雪蚤抗凍肽在生物和食品抗凍保存中的應(yīng)用，所述抗凍中的應(yīng)用具體為菌體凍存中的保證菌體的活力，所述菌體為嗜熱鏈球菌；所述重組雪蚤抗凍肽SF-P采用以下方法制備得到：
步驟一：將人工合成的抗凍肽編碼基因構(gòu)建于克隆載體上；其中，所述克隆載體包括標(biāo)簽序列，所述標(biāo)簽序列如SEQ?ID?NO.1所示；合成的抗凍肽編碼基因長(zhǎng)度為252bp，其基因序列如SEQ?ID?NO.2所示。
步驟二：將含有所述抗凍肽編碼基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，進(jìn)行蛋白表達(dá)；
步驟三：用親和層析法對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化；
步驟四：使用蛋白酶切開純化蛋白標(biāo)簽，獲得所述抗凍肽。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟一中，所述克隆載體為PET28a-sumo載體。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟二中，所述大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞為大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟三中，所述親和層析法中所用層析柱為鎳柱。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟四中，所述蛋白酶為sumo蛋白酶，所述標(biāo)簽為His-sumo標(biāo)簽。
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