[發明專利]一種狂犬病毒抗體檢測試紙及其制備方法與檢測方法

有效

• 申請號: 201910291451.8
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109959789B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 殷玉和;石晶;劉偉;王慧慧;王倩;丁秋雨;趙玉環;倪婷婷;王瑩;夏振強
• 申請（專利權）人: 長春西諾生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/531
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 劉微

本發明公開了一種狂犬病毒抗體檢測試紙及其制備方法與檢測方法，屬于抗體檢測試紙技術領域，解決現有技術存在假陽性風險和安全隱患的問題。試紙由一端至另一端依次包括：包被狂犬病毒抗原的樣品墊、包被抗狂犬病毒抗原的單克隆抗體的金標墊、包被檢測線和質控線的硝酸纖維素膜、以及吸水墊，其彼此相互重疊并貼于背板的上表面；其中，樣品墊包被的狂犬病毒抗原為狂犬病毒樣顆粒。本發明采用的標記抗原為昆蟲細胞表達的狂犬病病毒樣顆粒，避免假陽性的發生，而且使用抗狂犬病病毒G蛋白的單克隆抗體與血液中的中和抗體進行競爭抗原，提高檢測的準確性和靈敏度，病毒樣顆粒沒有核酸成分，消除了采用全病毒作為標記抗原而產生的生物安全隱患。

技術領域

本發明涉及抗體檢測試紙技術領域，尤其涉及一種狂犬病毒抗體檢測試紙及其制備方法與檢測方法。

背景技術

目前，國際上通用的抗體檢測方法有酶聯免疫吸附試驗、快速熒光灶抑制試驗、中和免疫熒光試驗、小鼠中和試驗等，均需要較高的試驗環境、精密的試驗儀器、專業的操作人員等條件，無法方便快速的對狂犬病毒抗體水平進行監測，不利于較大范圍的實施。

免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique)是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，具有使用方便快速，反應能在15-20分鐘內完成，便于基層和現場使用，具有成本低、標記物穩定等特點。

目前的狂犬病病毒抗體檢測試紙條所采用的標記抗原為狂犬病病毒全病毒，而狂犬疫苗也為全病毒疫苗，由于不可能達到百分百純化，疫苗中會存在病毒碎片、牛血清和細胞成分，體內產生的抗體包括抗狂犬病病毒5種結構蛋白(M，G，N，P，L)的抗體，抗牛血清抗體和抗細胞成分的抗體，而當使用全病毒作為標記抗原時，也不可避免標記抗原中存在上述病毒碎片、牛血清和細胞碎片等殘余成分，因此，使用全病毒標記的狂犬病病毒檢測試紙條與血液樣本中結合的不一定為中和抗體，存在假陽性的風險。

發明內容

本發明針對上述技術問題，提供一種狂犬病毒抗體檢測試紙及其制備方法與檢測方法。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種狂犬病毒抗體檢測試紙，由一端至另一端依次包括：包被狂犬病毒抗原的樣品墊、包被抗狂犬病毒抗原的單克隆抗體的金標墊、包被檢測線和質控線的硝酸纖維素膜、以及吸水墊，其彼此相互重疊并貼于背板的上表面；

其中，樣品墊包被的狂犬病毒抗原為狂犬病毒樣顆粒，檢測線包被有抗狂犬病毒抗原的單克隆抗體，質控線包被有金黃色葡萄球菌A蛋白，抗狂犬病毒抗原的單克隆抗體由膠體金標記。

優選地，樣品墊包被的狂犬病毒抗原的蛋白濃度為0.5-2.0g/L。

優選地，狂犬病毒樣顆粒的基本組裝元件包括狂犬病病毒G蛋白和M蛋白。

優選地，狂犬病毒樣顆粒是由狂犬病毒CTN-1株糖蛋白經Bac-to-Bac桿狀病毒-Sf9昆蟲細胞表達系統表達的病毒樣顆粒。

優選地，所述金標墊墊包被的抗狂犬病毒抗原的單克隆抗體的蛋白濃度為50μg/ml。

優選地，檢測線包被的抗狂犬病毒抗原的單克隆抗體的蛋白濃度為1.0-2.0g/L。

優選地，質控線包被的金黃色葡萄球菌A蛋白的蛋白濃度為1.0-2.0g/L。

本發明還提供了上述的狂犬病毒抗體檢測試紙的制備方法，包括以下步驟：

S1、樣品墊制備：制備和純化狂犬病毒抗原，將純化后的狂犬病毒抗原用內含2％的Tween-20的20mM四硼酸鈉溶液稀釋成0.5-2.0mg/ml，噴涂于玻璃纖維素膜上，作為樣品墊；