[發(fā)明專利]基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910290762.2
• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN110108691A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黎小椿;龐永豐;羅楊合;聶輝;伍淑婕;段振華
• 申請（專利權(quán)）人: 賀州學(xué)院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N1/28;G01N1/44
• 代理公司: 深圳益諾唯創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44447
• 代理人: 肖婉萍

1.一種基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

a、制備已知濃度的Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液體系：于刻度試管中，依次加入30～200μL 9nmol/L雙鏈DNA溶液，10～150μL 1×10^-5mol/L的Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻室溫下靜置8min后，加入10～500μL 19.9mg/L銀納米粒子溶液，然后加入10～50μL 4.65×10^-2mol/L混合溶液，搖勻后加入20～120μL 5.23×10^-5mol/L的羅丹明6G溶液，加水定容至2.0mL；

b、制備空白對照溶液體系：用步驟a中的方法不加Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液制備空白對照溶液體系；

c、分別取步驟a、b制備的Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液體系及空白對照溶液體系于石英皿中，在拉曼光譜儀上，設(shè)定儀器參數(shù)，掃描獲得體系的表面增強拉曼光譜，測定611cm^-1處的SERS峰強度I，同時測定空白對照溶液體系的SERS峰強度I₀，計算ΔI＝I₀–I；

d、以ΔI對Hg²⁺的濃度關(guān)系作工作曲線；

e、荸薺皮中汞離子的測定：對荸薺皮進(jìn)行消解，得到荸薺皮消解液，按照步驟a的方法制備樣品溶液，其中，加入的Hg²⁺標(biāo)準(zhǔn)溶液替換為樣品溶液，并按步驟c的方法測定樣品溶液的SERS峰強度I_樣品，根據(jù)步驟d的工作曲線計算出樣品溶液中Hg²⁺的含量。

2.如權(quán)利要求1所述的基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法，其特征在于，步驟a中，所述雙鏈DNA溶液的制備方法為：在15mL的比色管中，依次加入0.5mL 0.144μmol/L的單鏈DNA，0.5mL 0.144μmol/L的Taq酶，360μL 2mol/L NaCl溶液，1.45mL pH7.2的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液，5.19mL的超純水，混勻后，于80℃水浴鍋中水浴加熱15min，水浴后取出自然冷卻1.5h，即得到所述的雙鏈DNA溶液，然后保存于4℃冰箱備用。

3.如權(quán)利要求2所述的基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法，其特征在于，所述三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液的制備方法為：依次加入5.0mL 0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷、9.0mL 0.1mol/L HCl，混合均勻后定容到20mL。

4.如權(quán)利要求1所述的基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法，其特征在于，步驟a中，所述銀納米粒子溶液的制備方法為：量取40.0mL超純水于100mL錐形瓶中，在轉(zhuǎn)速為500r/p的磁力攪拌器攪拌下，依次加入3.5mL 10g/L檸檬酸三鈉溶液和0.385mL 2.4×10^-2mol/L AgNO₃，攪拌混勻后，逐滴緩慢滴加4.0mL 0.5g/L NaBH₄，溶液從淺黃色逐漸變?yōu)辄S色，繼續(xù)攪拌15min后，定容于50mL棕色容量瓶，得到19.9mg/L銀納米粒子溶液，于4℃冰箱保存。

5.如權(quán)利要求1所述的基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法，其特征在于，步驟a中，所述混合溶液的制備方法為：依次加入3.72mL 0.2mol/L乙二胺四乙酸二鈉、5mL 2mol/L NaCl、0.5mL 0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷，混勻后定容到16mL。

6.如權(quán)利要求1所述的基于DNA酶SERS技術(shù)測定荸薺皮中痕量汞離子的方法，其特征在于，步驟a中，所述雙鏈DNA溶液的體積為100μL，所述銀納米粒子溶液的體積為400μL，所述混合溶液的體積為30μL，所述羅丹明6G溶液的體積為80μL。