[發(fā)明專利]一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的探針、表面等離子共振生物傳感器及檢測轉(zhuǎn)基因植物的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910290686.5
• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN110093438A
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉;李亮;金蕪軍;安娜;張玉昆;文婷婷;丁佳麒
• 申請（專利權(quán)）人: 長春理工大學;中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6837;C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 王浩然

本公開涉及一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的探針、表面等離子共振生物傳感器及檢測轉(zhuǎn)基因植物的方法。所述探針的核苷酸序列為SEQ ID NO：1所示的序列。本公開的探針及含有該探針的表面等離子共振生物傳感器能夠特異性地檢測cry1A基因，檢測靈敏度高、樣品無需標記且可再生，便于使用；該傳感器克服了傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因檢測PCR方法的耗時長、費用高且不可重復檢測的缺點，且實踐證明對于物種間存在差異的DNA序列，同樣可設(shè)計簡并單鏈核酸探針用于轉(zhuǎn)基因檢測，可以實現(xiàn)多種抗蟲(cry1A)基因的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品大規(guī)模、高通量檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開涉及生物技術(shù)產(chǎn)品分析測試領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的探針、表面等離子共振生物傳感器及檢測轉(zhuǎn)基因植物的方法。

背景技術(shù)

隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應用與迅速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的種類與數(shù)量逐漸增加，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性也越來越被社會公眾廣泛關(guān)注，因此，轉(zhuǎn)基因檢測工作在保證轉(zhuǎn)基因安全性上發(fā)揮著重大的作用。目前，聚合酶鏈式反應(PCR)是轉(zhuǎn)基因生物的檢測主要方法，但其反應時間較長、實驗程序復雜、且為“終點法”，即每一個反應中所使用的試劑、耗材在實驗結(jié)束后均不可重復使用。

發(fā)明內(nèi)容

本公開的目的是提供一種探針及既能提高檢測靈敏度又可再生的生物傳感器。

為了實現(xiàn)上述目的，本公開第一方面提供一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的探針，所述探針的核苷酸序列為SEQ ID NO：1所示的序列。

本公開第二方面提供一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的表面等離子共振生物傳感器，所述表面等離子共振生物傳感器包括傳感芯片，所述傳感芯片上偶聯(lián)有本公開第一方面所述的探針。

可選地，所述傳感芯片表面結(jié)合有鏈霉親和素；所述探針5’端標記有生物素。

可選地，所述偶聯(lián)包括如下步驟：將含有所述探針的偶聯(lián)溶液流經(jīng)所述芯片，使所述探針與所述芯片表面結(jié)合，得到所述表面等離子共振生物傳感器。

可選地，所述偶聯(lián)溶液還含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20，所述探針在所述偶聯(lián)溶液中的濃度為20～50nM，所述偶聯(lián)的時間為180～300s；所述探針的偶聯(lián)量為200～400RU。

本公開第三方面提供一種檢測轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述檢測的目標基因為cry1A基因，該方法包括如下步驟：S1，提取待測植物的基因組DNA；S2，使含有所述基因組DNA的溶液流經(jīng)所述傳感芯片，并檢測RU值響應信號；若產(chǎn)生RU值響應信號，則所述待測植物中含有所述目標基因，若未產(chǎn)生RU值響應信號，則所述待測植物中不含有所述目標基因；所述傳感芯片為本公開第二方面所述的傳感器的所述傳感芯片。

可選地，步驟S2中的所述含有所述基因組的溶液為所述基因組DNA與PBSM緩沖液的混合溶液；所述混合溶液流經(jīng)所述傳感芯片的流速為10～30μL/min，時間為120～300s。

可選地，所述PBSM緩沖液的pH為7.0～8.0，所述PBSM緩沖液含有濃度為125～150mM的NaCl、濃度為2.0～3.0mM的KCl、濃度為10～15mM的Na₂HPO₄、濃度為1～5mM的KH₂PO₄、濃度為0.0005～0.001體積％的吐溫20和濃度為15～20mM的MgCl₂。

可選地，該方法還包括在步驟S2之后，將所述傳感芯片再生，所述再生的方法包括：使再生試劑與所述傳感芯片接觸30～60s進行再生處理；所述再生試劑為濃度為10～50mM NaOH和/或50mM NaOH與1M NaCl的混合溶液。

可選地，所述待測植物包括水稻、玉米、大豆和棉花中的至少一種。