[發(fā)明專利]一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的探針、表面等離子共振生物傳感器及檢測轉(zhuǎn)基因植物的方法

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• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN110093438A
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設計）人: 張曉;李亮;金蕪軍;安娜;張玉昆;文婷婷;丁佳麒
• 申請（專利權(quán)）人: 長春理工大學;中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6837;C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 王浩然

1.一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的探針，其特征在于，所述探針的核苷酸序列為SEQ IDNO：1所示的序列。

2.一種用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的表面等離子共振生物傳感器，其特征在于，所述表面等離子共振生物傳感器包括傳感芯片，所述傳感芯片上偶聯(lián)有權(quán)利要求1所述的探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的傳感器，其中，所述傳感芯片的表面結(jié)合有鏈霉親和素；所述探針5’端標記有生物素。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的傳感器，其中，所述偶聯(lián)包括如下步驟：將含有所述探針的偶聯(lián)溶液流經(jīng)所述芯片，使所述探針與所述芯片表面結(jié)合，得到所述表面等離子共振生物傳感器。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的傳感器，其中，所述偶聯(lián)溶液還含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20，所述探針在所述偶聯(lián)溶液中的濃度為20～50nM，所述偶聯(lián)的時間為180～300s；所述探針的偶聯(lián)量為200～400RU。

6.一種檢測轉(zhuǎn)基因植物的方法，其特征在于，所述檢測的目標基因為cry1A基因，該方法包括如下步驟：

S1，提取待測植物的基因組DNA；

S2，使含有所述基因組DNA的溶液流經(jīng)所述傳感芯片，并檢測RU值響應信號；若產(chǎn)生RU值響應信號，則所述待測植物中含有所述目標基因，若未產(chǎn)生RU值響應信號，則所述待測植物中不含有所述目標基因；所述傳感芯片為權(quán)利要求2～5中任意一項所述的傳感器的傳感芯片。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，步驟S2中的所述含有所述基因組的溶液為所述基因組DNA與PBSM緩沖液的混合溶液；所述混合溶液流經(jīng)所述傳感芯片的流速為10～30μL/min，時間為120～300s。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述PBSM緩沖液的pH為7.0～8.0，所述PBSM緩沖液含有濃度為125～150mM的NaCl、濃度為2.0～3.0mM的KCl、濃度為10～15mM的Na₂HPO₄、濃度為1～5mM的KH₂PO₄、濃度為0.0005～0.001體積％的吐溫20和濃度為15～20mM的MgCl₂。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，該方法還包括在步驟S2之后，將所述傳感芯片再生，所述再生的方法包括：使再生試劑與所述傳感芯片接觸30～60s進行再生處理；所述再生試劑為濃度為10～50mM NaOH和/或及50mM NaOH與1M NaCl的混合溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述待測植物包括水稻、玉米、大豆和棉花中的至少一種。