[發明專利]一種食品中牛源成分快速檢測方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201910290331.6
• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN110055340B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 許文濤;羅云波;黃昆侖;杜再慧;張超
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6888
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測食品中牛源成分的快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）待測樣品提取DNA；

（2）以提取DNA為模板，采用針對內標準基因設計的特異性LAMP引物組合進行LAMP檢測；

（3）結果判斷：采用膠體金核酸試紙條進行結果判斷，檢測T線和質控C線均有紅色條帶，含有目的基因；質控C線有紅色條帶，而檢測T線無條帶，不含有目的基因；

所述內標準基因序列如SEQ ID NO.1所示；

所述特異性LAMP引物組合，包括以下4條引物：

F3：	5’-ACACTCCACCTCCCTCCT-3’；
B3：	5’-ATTTGAACTGGGTGCCTCC-3’；
FIP：	5’-TGAGGGAGACAGACTGGAGCCTCCTCCTCCTCCTCCTCTC-3’；
BIP：	5’-TCTGCTTTCACCAGAAGGGCAAGGGGTCCTATGTCCCTGAA-3’；

所述膠體金核酸試紙條包含膠體金核酸試紙條測試線與質控線，測試線標記有Digoxin抗體，質控線標記有生物素二抗，結合墊有膠體金-生物素抗體標記物。

2.如權利要求1所述的特異性LAMP引物組合在檢測牛源成分中的應用。

3.如權利要求1所述的特異性LAMP引物組合在食品牛成分鑒定中的應用。

4.如權利要求1所述的一種檢測食品中牛源成分的快速檢測方法在牛源成分鑒定中的應用。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述LAMP檢測體系為25 μL，具體配置為：1x Thermopol buffer，0.4 mM dNTP，3 mM MgSO₄，1.0 M 甜菜堿，1.6μM 引物FIP，1.6μM 引物BIP，0.2μM引物F3，0.2μM引物B3，8 U Bst DNA聚合酶大片段。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，LAMP檢測反應條件為：60-65℃恒溫20min，85℃ 5min，然后終止反應。