[發明專利]一種絲瓜抗黃瓜花葉病毒CMV主效QTL的SLAF-SNP分子標記方法及應用

在審

• 申請號: 201910286999.3
• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN109880931A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 婁麗娜;蘇小俊;劉曉宏;劉哲
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 高姍

本發明公開了一種絲瓜抗黃瓜花葉病毒CMV主效QTL的SLAF?SNP分子標記方法及應用，屬于分子生物學技術領域，包括：高密度絲瓜遺傳圖譜的構建：定位分離群體的構建、絲瓜群體的黃瓜花葉病毒抗性鑒定、絲瓜抗黃瓜花葉病毒基因的遺傳分析、DNA提取及高通量測序；絲瓜抗CMV的QTL定位：根據F₂的抗黃瓜花葉病毒的表型數據，采用R/qtl進行QTL定位分析，繪制病級性狀QTL分布圖。本發明采用高通量的測序開發標記，快速，高效的構建了高密度的絲瓜遺傳圖譜，結合群體的抗性表型數據，獲得了絲瓜控制抗黃瓜花葉病毒基因的連鎖標記區段，解決了絲瓜可用于定位的分子標記缺乏的問題，縮短了與性狀連鎖標記的開發周期。

技術領域

本發明涉及一種SLAF-SNP分子標記方法及應用，特別是涉及一種絲瓜抗黃瓜花葉病毒CMV主效QTL的SLAF-SNP分子標記方法及應用，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

絲瓜是我國主要的渡秋淡蔬菜之一，黃瓜花葉病毒導致的病毒病是危害絲瓜的重要病害，對絲瓜的產量和品質均有較大影響，大田發病率達25～40％，個別地區和年份，病株率高達100％，病瓜畸形，品質差，造成很多營養成分的降低，嚴重影響了絲瓜的生產。

植物病毒病被稱為植物的“癌癥”，尚無特效的藥劑可以使用，且黃瓜花葉病毒的寄主范圍廣，可浸染100多個科的1 000多種植物，使其防治更加困難，因此，發掘并利用抗病基因，通過培育抗病毒病的絲瓜品種是防治絲瓜病毒病最為經濟、有效的途徑。

目前，尚缺乏有效充足的分子標記以供利用，限制了絲瓜抗病毒病基因的準確定位，進而限制了分子標記輔助育種技術的應用，單靠常規方法育種改良，周期長，效率低，造成絲瓜抗病毒病育種進展緩慢，關于絲瓜病毒病的研究，大多集中在防治方法、資源篩選等方面，而對抗病基因的分子機理研究較少，尤其是關于基因分子標記定位的研究尚不深入，因此，加強絲瓜抗黃瓜花葉病毒主效基因的挖掘利用，開發出用于輔助育種的分子標記，對絲瓜抗病毒病的分子育種至關重要。

單核苷酸多態性SNP，主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性，其在基因組上，數量多，分布廣泛，適用于快速、規模化的篩查，隨著測序技術的興起，SNP標記，具有易于開發，易于基因分型等優點，廣泛用于高密度遺傳圖譜的構建，基因的精細定位，大量樣本的分子標記驗證、分子標記輔助育種以及資源鑒定等方面。

發明內容

本發明的主要目的是為了提供一種絲瓜抗黃瓜花葉病毒CMV主效QTL的SLAF-SNP分子標記方法，在挖掘與絲瓜黃瓜花葉病毒抗性QTL緊密連鎖標記的基礎上進行的。

本發明的目的可以通過采用如下技術方案達到：

一種絲瓜抗黃瓜花葉病毒CMV主效QTL的SLAF-SNP分子標記方法，包括如下步驟：

步驟1：高密度絲瓜遺傳圖譜的構建

定位分離群體的構建、絲瓜群體的黃瓜花葉病毒抗性鑒定、絲瓜抗黃瓜花葉病毒基因的遺傳分析、DNA提取及高通量測序；

步驟2：絲瓜抗CMV的QTL定位

根據F₂的抗黃瓜花葉病毒的表型數據，采用R/qtl進行QTL定位分析，繪制病級性狀QTL分布圖。

進一步的，定位分離群體的構建，包括：以感CMV的絲瓜高代自交系“P1-21”為母本，以抗CMV的絲瓜高代自交系“P2-16”為父本，雜交獲得F₁代，F₁單株自交獲得F₂代遺傳分離群體。

進一步的，絲瓜群體的黃瓜花葉病毒抗性鑒定，包括：絲瓜的黃瓜花葉病毒接種體系和抗性鑒定。