[發明專利]用于膀胱癌診斷的尿液微小RNA靶基因數據庫比值模型建立方法

在審

• 申請號: 201910283065.4
• 申請日: 2019-04-10
• 公開（公告）號: CN109880909A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 董輝;李明明
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 寧夏合天律師事務所 64103
• 代理人: 郭立寧

用于膀胱癌診斷的尿液微小RNA靶基因數據庫比值模型建立方法，方法步驟為：模型數據信息采集；尿液標本收集及保存；樣品中總RNA的制備；第一鏈cDNA序列的合成；熒光定量PCR檢測；miRNA檢測結果Ct的比值（Ct _182?5p/Ct _152?3p）作為診斷指標。本發明提供的用于膀胱癌早期篩查的尿液微小RNA比值模型、試劑盒可以膀胱癌早期篩查提供更可靠的判斷依據，通過miR?182?5p和miR?152?3p的比值模型的客觀指標，與其他腫瘤早期篩查標志物進行綜合評價，提高診斷準確率，簡化診斷過程，在膀胱癌診療中起到重大作用。

技術領域

本發明涉醫學技術領域，尤其涉及一種用于用于膀胱癌診斷的尿液微小RNA靶基因數據庫比值模型建立方法。

背景技術

膀胱癌是世界上最常見的癌癥之一，存活率低且遠處轉移頻繁。通常，膀胱癌的診斷需要侵入式的膀胱鏡檢查和活組織檢查，通常伴有不良反應以及人為的不便。目前用于臨床診斷膀胱癌的方法敏感性范圍為57-82％至74-88％，隨著癌癥的階段和程度的增加，靈敏度也會增加。尿液細胞學作為無創性的標記技術也在廣泛使用，但是容易漏檢低等級的膀胱癌。隨著分子水平的發展對腫瘤發生、發展、治療相關機制的進一步闡述，迫切需要開發用于BC的初始診斷和監測的新型診斷方法。液體活檢來識別泌尿系統惡性腫瘤中的生物標志物近年來研究較多，體液（如血液和尿液）中基于DNA和RNA靶基因數據庫的標記物在診斷、預后、預測和監測泌尿系統惡性腫瘤方面是有希望的潛在標志物。因此，無創性，高靈敏度，基于尿液的診斷技術是今后本技術領域研究的重點。

微小RNA（miRNA）是一類具有調控功能的非編碼 RNA，編碼miRNA的基因可能位于功能基因編碼區、非編碼區，可能成簇表達或獨立表達。這種機體內源性表達的單鏈小分子RNA，位于基因組非編碼區，具有高度保守性，時序性和組織特異性。miRNA廣泛存在于各種真核細胞中，不編碼任何蛋白質，長度僅為20～24nt。成熟的miRNA 5′端有一個磷酸基團，3′端為羥基，由具有發夾狀結構的約70～90nt的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA誘導的基因沉默復合體（RNA-induced silencing complex，RISC）作用于靶點mRNA，通過對mRNA剪切或抑制其翻譯過程而調控基因的表達。miRNA作為生物調控分子，可以充當癌基因或腫瘤抑制因子，在腫瘤中表達異常，這種表達模式使miRNA可以作為腫瘤早期診斷或分期的一種標志物。

近年來，關于miRNA與腫瘤之間的關系研究已有很多報道，已經明確miRNA具有調節腫瘤細胞增殖、凋亡、血管形成、代謝以及耐藥等功能。研究顯示miRNA在肝癌、結直腸癌、乳腺癌、非細小細胞肺癌等具有臨床診斷價值。在膀胱癌患者的尿樣中可以發現反映膀胱癌特性的微小RNA。它們可以從多種生物樣品中提取，例如血漿，尿液，糞便或活組織檢查樣品，并且通常是穩定的并且能夠抵抗各種儲存條件。可以使用高度靈敏和標準化的技術非侵入性地檢測miRNA的變化并在體液中定量。miRNA是診斷，預后和臨床隨訪的分子標志物的良好候選者，從膀胱癌患者的尿液中發現和篩選膀胱癌相關的miRNA標志物，建立診斷方法，對早期診斷膀胱癌具有重要的意義和價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種尿液微小RNA比值模型建立方法，通過該方法建立的模型對于膀胱癌的診斷有很高的參考和應用價值。

本發明發現在尿液標本中，根據U6的含量進行標準化每個樣本，進一步檢測發現相對于正常人群尿液標本，miR-182-5p Ct值在膀胱癌混著尿液標本中表達差異，具有統計學意義。miR-152-3p表達穩定，組間無統計學意義。尿液中miRNA的差異表達情況可以用來作為膀胱癌特殊標志物，能夠預測膀胱癌的發生情況，建立一種計量方式，能夠對膀胱癌做出診斷。

實現本發明目的的技術方案為：用于膀胱癌診斷的尿液微小RNA靶基因數據庫比值模型建立方法，該比值模型的建立方法步驟如下：