[發明專利]一種鑒定秋播大白菜珍綠6號種子純度的引物及應用

有效

• 申請號: 201910280784.0
• 申請日: 2019-04-09
• 公開（公告）號: CN109811085B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 張斌;劉曉暉;王超楠;華德平;黃志銀;李梅;張紅;范偉強
• 申請（專利權）人: 天津科潤農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

本發明公開了一種用于鑒定珍綠6號秋播大白菜種子純度的SSR標記引物，它為SEQ ID NO:1?2所示的核苷酸序列。本發明進一步公開了利用SSR標記引物鑒定珍綠6號秋播大白菜雜交種純度的方法。本發明提供的特異性引物及方法，可以在實驗室3?5小時完成珍綠6號大白菜雜交種純度的純度鑒定，具有快速、穩定、不受環境影響等優點，能替代傳統田間種子純度鑒定方法，有利于珍綠6號秋播大白菜種子的質量控制和該品種的進一步推廣。

技術領域

本發明涉及大白菜珍綠6號雜交種種子純度鑒定SSR分子標記的引物序列及應用，屬于生物技術領域。

背景技術

大白菜（Brassica rapa L. ssp pekinensis）屬于十字花科蕓薹屬，是我國最重要的蔬菜之一，長期以來在居民的菜籃子中占重要地位。種子純度是確保優質大白菜品種能夠高產穩產、保證品質的首要因素，傳統的大白菜種子純度鑒定方法一般采用田間直接鑒定的方式，通過在田間種植大白菜，待生長到一定的發育階段，根據其生長特性判斷種子純度，具有周期長、受環境影響大，用工多等缺點，經常影響種子的正常銷售。隨著分子生物學的發展，分子標記輔助育種技術越來越多的應用于作物育種的全過程。篩選具有多態性的SSR分子標記，通過PCR擴增，在實驗室內即可鑒定大白菜商品種的種子純度，具有用時短、不受環境影響等優點，可廣泛用于種子的純度鑒定。

珍綠6號是天津科潤農業科技股份有限公司蔬菜研究所育成的中熟直筒疊抱型大白菜品種，株高約52 cm，球高約40 cm，外葉深綠色亮澤且多皺無茸毛，心葉黃色，球形周正美觀。生育期70~80天，適收期較長，中心柱偏圓，耐貯性好，是一個推廣面積較廣的秋播大白菜品種。前期珍綠6號種子純度的鑒定，采用直接在田間種植、觀察性狀的傳統方式進行，周期長、易受環境影響，經常影響種子的正常銷售，開發一種可以快速、穩定鑒定種子純度的方法，有利于珍綠6號大白菜種子的銷售及進一步的推廣工作。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測珍綠6號大白菜雜交種種子純度的SSR標記的引物序列及應用，為實現該目的，本發明采用以下技術方案：

一種用于檢測珍綠6號大白菜雜交種種子純度的SSR標記的引物序列，其特征在于它為SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列：

ACG TTA AGT TCA GGA ACT ATG CAG AGG SEQ ID NO:1

AAC TCT TGA CGA TGG GTT CAG TTG G SEQ ID NO:2。

本發明進一步公開了采用所述的特異性引物檢測檢測珍綠6號大白菜雜交種種子純度的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（1）提取珍綠6號雜交種待測樣品的基因組DNA；

（2）以上述樣品的基因組DNA為模板，以SSR標記引物為特異性引物進行PCR擴增；采用的反應體系為：10 μL體系，包括：10×PCR Buffer，1.0 μL；2.5 mM dNTP，0.2 μL；10 μmol·L-1 primers，0.4 μL；5 U·μL-1 Taq，0.2 μL；50 ng·μL-1 DNA，1.5 μL；ddH2O，6.7μL。采用的擴增程序為：94℃預變性5 min；94℃變性30 s，57℃復性30 s，72℃延伸30 s，35個循環；72℃終延伸 5 min。

（3）將上述PCR擴增獲得的產物，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、銀染；

（4）統計上述銀染的結果：同時含有父本和母本雙親材料條帶的種子為雜交種，只含有母本或父本材料條帶的種子為非雜交種的種子。所檢測珍綠6號雜交種純度（%）=（檢測種子總粒數-非雜交種粒數）/（檢測種子總粒數）×100%。