[發明專利]一種鑒定秋播大白菜珍綠6號種子純度的引物及應用

有效

• 申請號: 201910280784.0
• 申請日: 2019-04-09
• 公開（公告）號: CN109811085B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 張斌;劉曉暉;王超楠;華德平;黃志銀;李梅;張紅;范偉強
• 申請（專利權）人: 天津科潤農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種采用SSR標記引物檢測珍綠6號秋播大白菜種子純度的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（1）提取珍綠6號雜交種待測樣品的基因組DNA；

（2）以上述樣品的基因組DNA為模板，以SSR標記引物為特異性引物進行PCR擴增；所述SSR標記引物序列為：

ACG TTA AGT TCA GGA ACT ATG CAG AGG 和

AAC TCT TGA CGA TGG GTT CAG TTG G

采用的反應體系為：10 μL體系，包括：10×PCR Buffer，1.0 μL；2.5 mM dNTP，0.2 μL；10 μmol·L-1 primers，0.4 μL；5 U·μL-1 Taq，0.2 μL；50 ng·μL-1 DNA，1.5 μL；ddH2O，6.7 μL；

采用的擴增程序為：94℃預變性5 min；94℃變性30 s，57℃復性30 s，72℃延伸30 s，35 個循環；72℃終延伸 5 min；

（3）將上述PCR擴增獲得的產物，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、銀染；待測樣品PCR擴增產物的電泳條帶同時含有父本材料145 bp擴增產物的條帶和母本材料122 bp擴增產物的條帶，為珍綠6號雜交種的種子；

（4）統計上述銀染的結果：所檢測珍綠6號雜交種純度（%）=（檢測種子總粒數-非雜交種粒數）/（檢測種子總粒數）×100%。

2.權利要求1所述的檢測方法在用于快速鑒定珍綠6號秋播大白菜種子純度方面的應用。