[發明專利]一種阿司匹林藥物相關基因基因多態性檢測的引物組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201910277368.5
• 申請日: 2019-04-08
• 公開（公告）號: CN110066868A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發明（設計）人: 田曉麗
• 申請（專利權）人: 大連美納醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 大連至誠專利代理事務所(特殊普通合伙) 21242
• 代理人: 涂文詩;馬玉戈

1.一種阿司匹林藥物相關基因基因多態性檢測的引物組，其特征在于，包括，

GPIIIa(176)基因多態性的檢測引物

5′-TCTTACAGGCCCTGCCTGT-3′ SEQ ID NO:1

5′-TTACAGGCCCTGCCTAC-3′ SEQ ID NO:2

5′-CAGAGCCCTTGTCGCTGA-3′ SEQ ID NO:3

PEAR1(1568697)基因多態性的檢測引物

5′-TCTGCTG TCTCACTTCAA-3′ SEQ ID NO:4

5′-CTTCTGCTG TCTCACTTCTG-3′ SEQ ID NO:5

5′-CTAAACTCCAGCTCAGCT-3′ SEQ ID NO:6

內控的檢測引物

5′-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3' SEQ ID NO:7

5′-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3' SEQ ID NO:8。

2.一種阿司匹林藥物相關基因基因多態性檢測的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1所述的引物組、PCR緩沖液、陽性對照液和陰性對照液。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR緩沖液包括3’→5’外切酶活性高保真Taq酶、1.0-5.0mM的MgCl₂、1.0-5.0mM的dATP、1.0-5.0mM的dTTP、1.0-5.0mM的dGTP、1.0-5.0mM的dCTP以及SYBR Green I。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照液為GPIIIa質粒混合液以及PEAR1質粒混合液，GPIIIa質粒混合液含有帶有待檢測突變位點GPIIIa的等位基因，PEAR1質粒混合液含有帶有待檢測突變位點PEAR1的等位基因。

5.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照液為Tris-HCL緩沖液，所述的Tris-HCL緩沖液的濃度為7-13mM，pH為7.5-8.5。

6.一種阿司匹林藥物相關基因基因多態性的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟

步驟S1：對待檢測樣本抽提DNA樣本；

步驟S2：取出適量PCR緩沖液，與各基因多態性的檢測引物形成的野生型和突變型引物組、內參的檢測引物組分別混勻形成各反應液，分裝至反應管渦旋振蕩10秒，2000rpm離心15秒，之后，分裝至各PCR反應管；

步驟S3：取出適量PCR緩沖液，與各基因多態性的檢測引物形成的突變型引物組分別混勻形成各陽性對照反應液，渦旋振蕩10秒，2000rpm離心15秒，之后，分裝至各PCR反應管；

步驟S4：取出適量PCR緩沖液，與各基因多態性的檢測引物形成的野生型引物組分別混勻形成各陰性對照反應液，渦旋振蕩10秒，2000rpm離心15秒，之后，分裝至各PCR反應管；

步驟S5：加DNA樣本，將DNA樣本分別加入到步驟S2形成的各反應液的PCR反應管中，將各陽性對照液加入到步驟S3形成的對應的各陽性對照反應液的PCR反應管，將陰性對照液分別加入到步驟S4形成的各陰性對照反應液的PCR反應管中，將所有PCR反應管放入熒光定量PCR儀，設定反應條件，進行擴增反應，得到各擴增產物；

步驟S6：檢測步驟S5形成的各產物的SYBR信號熒光強度，以SYBR信號熒光強度達到設定的閾值所需的循環次數Ct值作為相關突變基因存在的判斷標準。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述的待檢測樣本包括手術切除的新鮮病理組織、甲醛固定石蠟包埋的病理組織、石蠟切片、全血、血漿、血清、胸腔積液、或口腔黏膜脫落細胞。