[發(fā)明專利]一種具有高精密度的熒光免疫試紙條制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910267977.2
• 申請(qǐng)日: 2019-04-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109884294B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王國(guó)新;廖滔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳無(wú)微華斯生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 深圳正和天下專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44581
• 代理人: 楊波

1.一種具有高精密度的熒光免疫試紙條制備方法，其特征在于：包括以下步驟，

S1：預(yù)備用于進(jìn)行免疫試紙條制備的PVC底板；

S2：制備用于與PVC底板相銜接于一體的樣品墊；所述樣品墊的制備步驟為：將樣品墊置于樣品墊處理液中浸泡30-120分鐘，取出后置于37℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干至少10小時(shí)以上；

S3：制備用于與樣品墊相銜接于一體的結(jié)合墊；所述結(jié)合墊的制備步驟為：在浸漬槽中，將50mL結(jié)合墊處理液浸漬一張200*300mm玻璃纖維素膜10min，送入鼓風(fēng)干燥箱干燥，設(shè)置干燥溫度37℃干燥時(shí)間為不少于10個(gè)小時(shí)；干燥處理后獲得預(yù)處理結(jié)合墊；將裁切好預(yù)處理結(jié)合墊置于噴金儀上，用濃縮的熒光抗體偶聯(lián)產(chǎn)物稀釋到工作濃度配成工作液，氣壓0.2MPa，包被量3μL/cm，完畢后在37℃干燥溫度下干燥時(shí)間不少于10小時(shí)；

S4：制備用于與結(jié)合墊相銜接于一體的NC膜；所述NC膜的制備步驟為：用事先配好的包被液分別將質(zhì)控線和檢測(cè)線的抗體、鏈霉親和素或者生物素稀釋到合適的濃度進(jìn)行包被，檢測(cè)線與NC膜的上端，質(zhì)控線在NC膜的下端；最后將包被后的NC膜轉(zhuǎn)入鼓風(fēng)干燥箱干燥，干燥溫度控制在37±1℃，干燥時(shí)間為不少于10個(gè)小時(shí)；

S5：將樣品墊、結(jié)合墊、NC膜以及吸水紙依次與PVC底板進(jìn)行銜接，制備得到最終的熒光免疫試紙條；

步驟S3中，濃縮的熒光抗體偶聯(lián)產(chǎn)物的制備步驟為：

A1：熒光微球的初洗與活化：吸取1％濃度W/V熒光微球100μL，加1mL的初洗液并用超聲清洗儀充分混勻，離心10min，用移液器吸棄上清，沉淀物用1mL的初洗液重懸并用超聲清洗儀充分混勻，重復(fù)洗3次，最后一次洗滌后用1mL的初洗液重懸并用超聲清洗儀充分混勻，確保微球呈單分散態(tài)；加入10mg/mLEDC 25μL、10mg/mL NHS 75μL活化30min；離心10min,用移液器吸棄上清，用1mL偶聯(lián)液重懸；

A2：抗體、鏈霉親和素或生物素的偶聯(lián)：對(duì)于抗體或者鏈霉親和素的偶聯(lián)，其步驟為，在1mL偶聯(lián)液重懸好的微球溶液中，超聲混勻，離心10min,棄上清，重復(fù)3次，加入400μL偶聯(lián)液重懸，按濃度加入抗體或者鏈霉親和素旋渦混勻5h，對(duì)于生物素的偶聯(lián)，其步驟為，在1mL偶聯(lián)液重懸好的微球溶液中，超聲混勻，離心10min,棄上清，重復(fù)3次，然后加入400μL偶聯(lián)液重懸，按濃度加入牛血清白蛋白(BSA)旋渦混勻5h，然后用1×PBS離心，15000rpm，10min，洗滌3次，然后分散在1mL 1×PB中，再加入0.1mg/mL的NHS-biotin，繼續(xù)反應(yīng)2h；

A3：封閉：偶聯(lián)完成后加入乙醇胺3μL，加入封閉液800μL，旋轉(zhuǎn)混勻儀封閉2h；

A4：終洗：封閉完成后，離心10min，去掉上清；用1mL終洗液重懸，超聲混勻，離心10min，用移液器盡量吸棄上清，重復(fù)3次；沉淀溶于100μL終洗液中，即為濃縮的熒光標(biāo)記抗體；

所述熒光免疫試紙所對(duì)應(yīng)的應(yīng)用方式為：

B1：試劑測(cè)試前，用樣本緩沖液按一定倍數(shù)稀釋要測(cè)試的樣本；

B2：測(cè)試時(shí)，去除熒光免疫試紙的外包裝，取出熒光免疫試紙，按水平放置，精確吸取稀釋后的樣本75μL，加入到熒光免疫試紙的加樣孔中，同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)；

B3：待室溫反應(yīng)10min后，將熒光免疫試紙放入到儀器的卡槽中；點(diǎn)擊對(duì)應(yīng)檢測(cè)儀器屏幕上的檢測(cè)按鍵，儀器開(kāi)始檢測(cè)，并顯示檢測(cè)結(jié)果；

B4：點(diǎn)擊打印，可打印出之前所檢測(cè)的結(jié)果。