[發(fā)明專利]一種具有高精密度的熒光免疫試紙條制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910267977.2
• 申請日: 2019-04-03
• 公開（公告）號: CN109884294B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王國新;廖滔
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳無微華斯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 深圳正和天下專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44581
• 代理人: 楊波

本發(fā)明首次將生物素?鏈霉親和素體系做為質(zhì)控線引入免疫層析體系，提供一種具有高精密度的免疫熒光試紙條制備方法，包括以下步驟S1：預(yù)備用于進(jìn)行免疫試紙條制備的PVC底板；S2：制備用于與PVC底板相銜接于一體的樣品墊；所述樣品墊的制備步驟為：將樣品墊置于樣品墊處理液中浸泡約30?120分鐘，取出后置于37℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干至少10小時以上；S3：制備用于與樣品墊相銜接于一體的結(jié)合墊；所述結(jié)合墊的制備步驟為：在浸漬槽中，將50mL結(jié)合墊處理液浸漬一張200*300mm玻璃纖維素膜10min，送入鼓風(fēng)干燥箱干燥，實際應(yīng)用過程中，不僅可以制備得到高精密度的熒光免疫試紙，且能作為解決目前免疫熒光法靈敏度和精密度較低問題的解決方法。

[技術(shù)領(lǐng)域]

本發(fā)明涉及熒光免疫試紙條制備方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種穩(wěn)定性和重現(xiàn)性優(yōu)良的具有高精密度的熒光免疫試紙條制備方法。

[背景技術(shù)]

免疫層析技術(shù)是20世紀(jì)末發(fā)展起來的結(jié)合免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的一種分析方法，該方法結(jié)合了標(biāo)記示蹤技術(shù)的高度靈敏性、抗原抗體反應(yīng)的高度特異性以及層析技術(shù)的簡易快速性，省去了繁瑣的加樣、洗滌步驟，因而操作簡單，短時間內(nèi)便可得到檢測結(jié)果等特點，廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等重要領(lǐng)域。而當(dāng)前免疫層析技術(shù)以膠體金免疫層析應(yīng)用的范圍最為廣泛，它通過條帶顯色對目標(biāo)物定性檢測或半定量分析。該方法雖然簡單快速，但精密度較差，難以準(zhǔn)確定量。因此如何提高檢測試劑的精密度成為當(dāng)前免疫層析方法的迫切問題。

生物素(Biotin)發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)60年代初，由咪唑酮環(huán)和噻吩環(huán)及其側(cè)鏈構(gòu)成。鏈霉親和素是目前實驗室中最常用的一類親和素，穩(wěn)定性強(qiáng)，其通過結(jié)構(gòu)中的色氨酸殘基與生物素中的咪唑酮環(huán)反應(yīng)結(jié)合，二者以1：4的比例共價結(jié)合，其解離常數(shù)為10-15mol/L，是抗原抗體結(jié)合能力的100萬倍，且不受酸、堿、變性計、高溫、蛋白溶解酶和有機(jī)溶劑的干擾，并且生物素和親和素容易獲取，所以在實驗研究和臨床中具有廣泛的應(yīng)用前景。

目前已有大量的文獻(xiàn)證明熒光免疫層析技術(shù)具有特異性強(qiáng)、簡便快速、無需特殊昂貴儀器等優(yōu)點，并且早在2013年就有相關(guān)專利CN104237517A公開了一種檢測有關(guān)蛋白的熒光免疫層析試紙條，但仍存在精密度較低的問題，而生物素-鏈霉親和素體系具有以下優(yōu)點：①生物素和鏈霉親和素是以1：4的比例結(jié)合，具有逐級放大效應(yīng)，可以極大的提高其靈敏度，這也是生物素-鏈霉親和素體系在免疫層析中最突出的優(yōu)點。②生物素和鏈霉親和素的特異結(jié)合能力強(qiáng)，是抗原抗體的100萬倍，其反應(yīng)高度專一，不會受反應(yīng)試劑濃度高低的影響，因此該組合應(yīng)用在免疫熒光層析中具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。③該體系的應(yīng)用范圍廣，適用于所有的抗原抗體的檢測。因此，將生物素-鏈霉親和素體系應(yīng)用到此方法上能夠大大的改善目前熒光免疫技術(shù)存在的問題。

而在2016年也有相關(guān)的專利CN105652008A公開了生物素-鏈霉親和素體系應(yīng)用于熒光免疫層析試紙條來檢測脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2，它能夠提高其靈敏度和精密度的問題，說明該體系應(yīng)用在熒光免疫層析試紙條是可行的，但該專利是把該體系用在檢測線上，并且有兩條標(biāo)記墊，而本發(fā)明僅用一條結(jié)合墊，并且把該體系應(yīng)用于質(zhì)控線的檢測，以保證質(zhì)控線的穩(wěn)定又不干擾目標(biāo)抗原的檢測(檢測線的值)，并且操作簡便，但目前為止還沒有這方面相關(guān)的專利。

[發(fā)明內(nèi)容]

為克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題，本發(fā)明提供一種穩(wěn)定性和重現(xiàn)性優(yōu)良的具有高精密度的熒光免疫試紙條制備方法。

本發(fā)明解決技術(shù)問題的方案是提供一種具有高精密度的熒光免疫試紙條制備方法，包括以下步驟，

S1：預(yù)備用于進(jìn)行免疫試紙條制備的PVC底板；

S2：制備用于與PVC底板相銜接于一體的樣品墊；所述樣品墊的制備步驟為：將樣品墊置于樣品墊處理液中浸泡約30-120分鐘，取出后置于37℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干至少10小時以上；