[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因玉米品系DAS40278-9檢測方法和試劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910266719.2
• 申請日: 2019-04-03
• 公開（公告）號: CN109825632A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發(fā)明（設計）人: 潘廣;凌杏園;章桂明;劉新嬌;向才玉;盧小雨;李芳榮;楊帆
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局食品檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;彭家恩

1.一種轉(zhuǎn)基因玉米品系DAS40278-9的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟，

PCR擴增體系配制步驟，包括將品系DAS40278-9特異引物組、品系DAS40278-9特異探針、HMG基因特異引物組、HMG基因特異探針和待測樣品的DNA加入到PCR反應液中，制成雙重PCR反應體系；

微滴生成步驟，包括在雙重PCR反應體系中加入微滴生成油，混勻后，將其轉(zhuǎn)移到微滴生成儀上，震蕩生成微滴；

PCR反應和微滴分析步驟，包括將微滴轉(zhuǎn)移到反應管中進行PCR反應，PCR反應結束后，采用微滴分析儀讀取每個微滴的擴增信號；

定量檢測步驟，根據(jù)讀取的擴增信號，采用軟件分析品系DAS40278-9的特異擴增拷貝數(shù)占內(nèi)源參考基因HMG基因特異擴增拷貝數(shù)的百分比，以此表示轉(zhuǎn)基因玉米品系DAS40278-9的含量；

所述品系DAS40278-9特異引物組的正向引物為Seq ID No.1所示序列，品系DAS40278-9特異引物組的反向引物為Seq ID No.2所示序列，所述品系DAS40278-9特異探針為Seq IDNo.3所示序列，所述HMG基因特異引物組的正向引物為Seq ID No.4所示序列，HMG基因特異引物組的反向引物為Seq ID No.5所示序列，所述HMG基因特異探針為Seq ID No.6所示序列；

Seq ID No.1：5’-CACGAACCATTGAGTTACAATC-3’

Seq ID No.2：5’-TGGTTCATTGTATTCTGGCTTTG-3’

Seq ID No.3：5’-CGTAGCTAACCTTCATTGTATTCCG-3’

Seq ID No.4：5’-TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA-3’

Seq ID No.5：5’-GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT-3’

Seq ID No.6：5’-CAATCCACACAAACGCACGCGTA-3’

其中，Seq ID No.3所示序列的品系DAS40278-9特異探針中，5’末端具有熒光基團，3’末端具有淬滅基團；Seq ID No.6所示序列的HMG基因特異探針中，5’末端具有熒光基團，3’末端具有淬滅基團。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述品系DAS40278-9特異探針中，5’末端的熒光基團為FAM，3’末端的淬滅基團為BHQ-1；所述HMG基因特異探針中，5’末端的熒光基團為HEX，3’末端的淬滅基團為BHQ-1。

3.一種轉(zhuǎn)基因玉米品系DAS40278-9定量檢測的試劑，其特征在于：所述試劑包括第一引物探針組合和第二引物探針組合，所述第一引物探針組合用于轉(zhuǎn)基因玉米品系DAS40278-9特異性檢測，所述第二引物探針組合用于HMG基因特異性檢測；

所述第一引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.1所示序列，反向引物為Seq IDNo.2所示序列，探針為Seq ID No.3所示序列，并且探針的5’末端具有熒光基團，3’末端具有淬滅基團；

所述第二引物探針組合中，正向引物為Seq ID No.4所示序列，反向引物為Seq IDNo.5所示序列，探針為Seq ID No.6所示序列，并且探針的5’末端具有熒光基團，3’末端具有淬滅基團。

4.根據(jù)權利要求3所述的試劑，其特征在于：Seq ID No.3所示序列的探針中，5’末端的熒光基團為FAM，3’末端的淬滅基團為BHQ-1；Seq ID No.6所示序列的探針中，5’末端的熒光基團為HEX，3’末端的淬滅基團為BHQ-1。

5.根據(jù)權利要求3或4所述的試劑在制備轉(zhuǎn)基因玉米檢測試劑盒或檢測設備中的應用。

6.一種轉(zhuǎn)基因玉米檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求3或4所述的試劑。

7.根據(jù)權利要求6所述的轉(zhuǎn)基因玉米檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒采用權利要求1或2所述的檢測方法對轉(zhuǎn)基因玉米品系DAS40278-9進行定量檢測。