[發(fā)明專利]一種榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910262435.6 | 申請(qǐng)日： | 2019-04-02 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109825445B | 公開（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉宇;王建瑞;谷麗凡;彭煒航;程顯好;崔永進(jìn);田偉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 魯東大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/14 | 分類號(hào)： | C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京惠智天成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11681 | 代理人： | 袁瑞紅 |
| 地址： | 264025 山東*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 液體 發(fā)酵 培養(yǎng)基 培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，其制備方法為：將按照重量份計(jì)的200份土豆切成0.8-1.2cm的小塊，在沸水中煮20分鐘，然后進(jìn)行過濾，取汁，后加入葡萄糖20份，亞硝酸鈉0.2份，磷酸二氫鉀1份，中藥酶提取液0.2-0.4份，定容成1000mL，即得，自然pH值；
所述中藥酶提取液的制備方法為：將中藥桑葉、艾葉和馬齒莧按照以下重量份：桑葉30份、艾葉40份和馬齒莧30份放入酶解罐中，加入蒸餾水得到藥水混合物，中藥和蒸餾水的重量比為1:10，然后加入纖維素降解酶和蛋白降解酶，纖維素降解酶和蛋白質(zhì)降解酶的加入量分別為藥水混合物總重量的1-1.5％和0.5-1％，再在恒溫50℃下降解24小時(shí)，最后取出過濾得濾液即是中藥酶提取液。
2.一種利用權(quán)利要求1所述的榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
(1)榆耳菌種復(fù)壯培養(yǎng)：
首先配制榆耳斜面固體培養(yǎng)基：將按照重量份計(jì)的200份土豆切成0.8-1.2cm的小塊，在沸水中煮20分鐘，然后進(jìn)行過濾，取汁，后加入葡萄糖20份，亞硝酸鈉0.2份，磷酸二氫鉀1份，中藥酶提取液0.2-0.4份，瓊脂20份，融化后，定容成1000mL，即得，自然pH值；然后將榆耳斜面固體培養(yǎng)基分裝、滅菌、冷卻、接種和菌種培養(yǎng)后，將長(zhǎng)勢(shì)好沒有出現(xiàn)退化現(xiàn)象的榆耳固體菌種挑選出；
(2)榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基的分裝和滅菌：
將榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基分裝至500mL的三角瓶中，每個(gè)三角瓶中裝250mL；封口，在121℃條件下，滅菌20min；
(3)液體原種制備：
將選出的長(zhǎng)勢(shì)好沒有出現(xiàn)退化現(xiàn)象的榆耳固體菌種在無菌操作下接種到榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基上，在溫度為20℃、轉(zhuǎn)速為120-150r/min的搖床中培養(yǎng)140-145h后取出，選擇長(zhǎng)勢(shì)好的榆耳液體菌種；
(4)榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)
將榆耳液體菌種在無菌操作下接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基上，在溫度為22-25℃、轉(zhuǎn)速為120-150r/min的搖床中培養(yǎng)160-180h，當(dāng)菌絲球濃度達(dá)到80％以上，菌絲球大小達(dá)到1毫米以上，結(jié)束培養(yǎng)，取出過濾烘干即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(1)中榆耳斜面固體培養(yǎng)基分裝和滅菌的方法為：將配制好的榆耳斜面固體培養(yǎng)基分裝于18mm×180mm試管中，封口，在121℃條件下，滅菌20min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(1)中榆耳斜面固體培養(yǎng)基接種和菌種培養(yǎng)的方法具體為：滅完菌后取出榆耳斜面固體培養(yǎng)基，自然冷卻至20℃-30℃，在無菌條件下，接入在0-4℃保存的榆耳菌種；將接好種的榆耳斜面固體培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱里，25℃培養(yǎng)8天。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)所述榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)基裝入容量為500mL的三角瓶中，每瓶250mL，然后121℃滅菌30min、冷卻接種，每瓶接液體菌種20mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)的方法，其特征在于，榆耳液體發(fā)酵培養(yǎng)的條件為：置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱里，25℃條件下，轉(zhuǎn)速為130r/min的搖床中培養(yǎng)140h。
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