[發明專利]有效改善骨髓造血微環境的免疫細胞的制備方法

在審

• 申請號: 201910256695.2
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109913411A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 謝海濤;陳玲珍;薛衛巍;王乃會
• 申請（專利權）人: 廣東先康達生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 深圳市凱達知識產權事務所 44256
• 代理人: 劉大彎

本發明公開了一種有效改善骨髓造血微環境的免疫細胞的制備方法，包括如下步驟：從血液中分離出血細胞；將血細胞置于0?5攝氏度的箱體內培養1?2小時；將血細胞置于細胞激活培養基中進行血細胞激活培養10?20小時，以便得到初步擴增的血細胞；將血細胞置于至少一種細胞培養基中加入激活試劑進行血細胞培養10?30小時，以便得到激活的血細胞；將激活的血細胞經過至少一次的生理鹽水清洗，從而得到有效改善骨髓造血微環境的免疫細胞的制備方法。本發明具有能通過改善骨髓造血微環境達到治療再生障礙性貧血等造血性疾病的效果的優點。

技術領域

本發明涉及醫藥領域，尤其是涉及一種有效改善骨髓造血微環境的免疫細胞的制備方法。

背景技術

再生障礙性貧血是一種骨髓造血功能衰竭癥，主要表現為骨髓造血功能低下、全血細胞減少和貧血、出血、感染征候群。其中慢性再生障礙性貧血是一種發病緩慢，病程相對較長，非常難于治療的血液系統疾病。再生障礙性貧血是由多種病因引起的以全血細胞減少為主要臨床表現的造血功能衰竭綜合征。我國與東南亞屬于再生障礙性貧血高發地區，年發病率為歐美地區的2-3倍。根據中性粒細胞數量(0.5×109/L)、血小板數(20×109/L)及病情發病急緩，分為重型再生障礙性貧血(SAA)和非重型再生障礙性貧血，其中重型再生障礙性貧血患者中性粒細胞小于0.2×109/L為極重型再生障礙性貧血(VSAA)。SAA尤其是VSAA預后差，不及時采取有效治療措施，患者可能因感染、出血而危及生命。再生障礙性貧血主要治療措施包括異基因造血干細胞移植、聯合免疫抑制治療和支持治療。其中HLA全相合同胞間異基因造血干細胞移植為治療SAA的首選治療方法?？剐叵?淋巴細胞球蛋白(ATG/ALG)聯合環孢素(CsA)的免疫抑制治療(IST)是不適于異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)的SAA患者的首選治療方案，可使60％-80％的患者完全或部分恢復自身造血。在中國，由于同胞供者的缺乏，近年IST作為SAA的一線治療方案已越來越多地應用于臨床。ATG治療達到完全緩解(CR)時間相對較慢，50％患兒在ATG治療12個月達到CR，90％患兒在24個月才能達到CR。在IST未取得治療反應之前，需要繼續輸注血制品或者注射G-CSF。此外，ATG屬于異種血清，可發生多種不良反應，包括即刻及遲發型變態反應。因此，本領域仍然需要改善骨髓造血微環境能用于治療再生障礙性貧血的藥物。

發明內容

有鑒于此，本發明目的在于提供一種能改善骨髓造血微環境用于治療再生障礙性貧血的免疫細胞制劑。

本發明的目的是采用如下技術方案實現：

一種有效改善骨髓造血微環境的免疫細胞的制備方法，包括如下步驟：

從血液中分離出血細胞；

將血細胞置于0-5攝氏度的箱體內培養1-2小時；

將血細胞置于細胞激活培養基中進行血細胞激活培養10-20小時，以便得到初步擴增的血細胞；

將血細胞置于至少一種細胞培養基中加入激活試劑進行血細胞培養10-30小時，以便得到激活的血細胞；

將激活的血細胞經過至少一次的生理鹽水清洗，從而得到有效改善骨髓造血微環境的免疫細胞的制備方法。

可選的，所述細胞激活培養基為添加了白介素-2和沙培林的無血清淋巴細胞培養基。

可選的，所述細胞激活培養基中添加了哺乳動物血清。

可選的，所述哺乳動物血清為哺乳動物胎血清。

可選的，所述激活試劑為鈣離子載體。

可選的，所述鈣離子載體選自A23187或離子霉素。

可選的，所述激活試劑為腺病毒。

可選的，所述血細胞包括從受試者獲得的外周血單個核細胞。