[發(fā)明專利]有效改善骨髓造血微環(huán)境的免疫細(xì)胞的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910256695.2
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109913411A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝海濤;陳玲珍;薛衛(wèi)巍;王乃會
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東先康達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 深圳市凱達(dá)知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 44256
• 代理人: 劉大彎

1.一種有效改善骨髓造血微環(huán)境的免疫細(xì)胞的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

從血液中分離出血細(xì)胞；

將血細(xì)胞置于0-5攝氏度的箱體內(nèi)培養(yǎng)1-2小時；

將血細(xì)胞置于細(xì)胞激活培養(yǎng)基中進(jìn)行血細(xì)胞激活培養(yǎng)10-20小時，以便得到初步擴(kuò)增的血細(xì)胞；

將血細(xì)胞置于至少一種細(xì)胞培養(yǎng)基中加入激活試劑進(jìn)行血細(xì)胞培養(yǎng)10-30小時，以便得到激活的血細(xì)胞；

將激活的血細(xì)胞經(jīng)過至少一次的生理鹽水清洗，從而得到有效改善骨髓造血微環(huán)境的免疫細(xì)胞的制備方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述細(xì)胞激活培養(yǎng)基為添加了白介素-2和沙培林的無血清淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述細(xì)胞激活培養(yǎng)基中添加了哺乳動物血清。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：所述哺乳動物血清為哺乳動物胎血清。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述激活試劑為鈣離子載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述鈣離子載體選自A23187或離子霉素。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述激活試劑為腺病毒。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述血細(xì)胞包括從受試者獲得的外周血單個核細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于：其中獲得外周血單個核細(xì)胞的步驟包括：在注射器中抽取血液，利用Ficoll-Hypaque分層法分層所述血液，并在Ficoll的界面處收集外周血單個核細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于：還包括進(jìn)行白細(xì)胞去除術(shù)的步驟。