[發明專利]唾液中幾種類固醇激素的定性定量檢測方法

在審

• 申請號: 201910256466.0
• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN109828073A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 鄔智剛;朱文漓;葉尚宇
• 申請（專利權）人: 成都益康譜科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種人體唾液中幾種類固醇激素的定性定量檢測方法，具體涉及一種唾液中8種類固醇激素的液相色譜串聯質譜檢測方法，所述的激素為17?羥基孕酮、孕酮、雄烯二酮、睪酮、脫氫表雄酮、皮質醇、皮質酮、醛固酮。該檢測方法將人體唾液樣本冷凍處理后經蛋白沉淀，超聲提取并過濾，隨后與內標液混合，反相SPE柱純化和目標產物的化學衍生。保證了唾液中這幾種目標激素的充分溶出，排除唾液中雜質的干擾，確保了檢測結果的準確性和穩定性。隨后，采用液相色譜分離與質譜離子對檢測聯用的方法對這8種激素進行同步定性和定量分析。該方法適用于人體唾液中結構類似、化學物理性質接近的激素分子的同步批量檢測，具有靈敏度高、精密度高、重復性好、檢測速度快等優點。充分滿足了臨床檢驗的需要，具有較高的臨床應用價值。

技術領域

本發明涉及唾液樣本檢測技術領域，尤其是涉及一種人體唾液中8種類固醇激素的檢測方法。

背景技術

人體內的類固醇激素按藥理作用分為腎上腺皮質類固醇激素和性激素兩大類。而類固醇激素都是由膽固醇激素為母體合成的，是一類脂溶性激素，它們在結構上都是環戊烷多氫菲衍生物。這些激素的功能雖然很不相同，但它們在結構上卻很相似。因為它們都是從膽固醇衍生而來，而且在體內在相應酶的作用下可以相互轉變，達到體內類固醇激素代謝通路的平衡狀態。膽固醇首先代謝成孕烯醇酮，然后在酶的作用下，一部分轉化為孕酮，產生孕激素和下游的鹽皮質激素；另一部分轉化為17-羥基孕酮和脫氫表雄酮，再分別轉化為糖皮質激素以及雄激素。雄激素最后再代謝生成雌激素。因此，體內的類固醇激素代謝是一個完整的通路，各種激素之間存在微妙的平衡關系。某些代謝通路的阻礙或缺失必將影響其它代謝通路的平衡，從而造成體內其它激素水平的變化，引起代謝相關的疾病發生。無論是某些通路上酶的缺失或活性降低，還是外源性激素的介入，都會不可避免的造成代謝通路的失衡。因此，準確的監控體內各類激素的水平變化以及相互之間的比例關系對于這些疾病的預防和風險評估起到至關重要的作用，同時也可以用來監控這些疾病的臨床治療效果和預后恢復評估。

先天性腎上腺皮質增生癥(CAH)是一組由腎上腺皮質類固醇合成通路各階段各類催化酶的缺陷，引起的以皮質類固醇合成障礙為主的常染色體隱性遺傳性疾病。患者需要通過終身激素治療的方法對疾病進行控制。而激素替代治療的方法必須是個性化，同時必須隨時密切監控體內激素及其代謝的反饋。臨床上一般通過內分泌激素監測以及體格生長指標、青春發育進程和骨齡監測作為近期的判斷指標，兩者需有機結合，綜合判斷。但空腹采血取樣檢測不便于多點監控，病人依從性差。同時，血樣檢測各激素測值尚無單個的金標準切割值，各激素參數需結合臨床指標調節劑量。而唾液中各種類固醇激素都是以活性物質的形式存在，客觀反應了體內真實的激素代謝狀況。同時，由于唾液取樣為無創取樣，方便快捷，不需要專業醫護人員的陪同，病人就可以自行多次取樣。因此，通過唾液取樣的方式對患者體內相關激素含量進行跟蹤監測，可以建立個性化的新型激素治療方案及安全性評價體系。通過唾液檢測各類相關激素的水平及比例，在臨床上可以指導這類疾病的個性化治療，也為這類疾病的長期安全性評估提供重要的依據。

因此，本研究開發一種唾液中多種類固醇激素的檢測方法。該方法具有檢測靈敏度高、重復性好、檢測速度快，檢測批量大的優點，能高效的對多種激素進行精確的定量檢測，具有良好的科研和臨床應用前景。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種高效液相色譜聯用串聯質譜技術檢測人體唾液中多種類固醇激素產物的方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

1、一種人體唾液中幾種類固醇激素的檢測方法，其特征在于，將人體唾液樣本冷凍處理后經蛋白沉淀，超聲提取并過濾，隨后與內標液混合，反相SPE柱純化和目標產物的化學衍生得到待測樣本；

2、將上述待測樣本通過液相色譜和質譜聯用檢測，同步對幾種激素進行定性和定量的批量檢測；

進一步的，上述步驟1中樣本冷凍時間為>24小時、溫度為-20℃；