[發明專利]一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的引物、探針和試劑盒

在審

• 申請號: 201910256460.3
• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN110205369A
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發明（設計）人: 鐘柏茂;陸小梅;袁旭;彭琪;黎四平;李文瑞
• 申請（專利權）人: 東莞市第八人民醫院（東莞市兒童醫院）;東莞市兒科研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 盧春華

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的引物、探針和試劑盒,所述引物包括用于擴增STAT3基因的引物F1和引物R1、以及用于擴增對照基因GADPH的引物F2和引物R2。所述探針包括用于檢測STAT3基因的探針P1和用于檢測對照基因GAPDH的探針P2。所述試劑盒包括上述所述的引物和上述所述的探針。本發明的引物和探針特異性好，檢測靈敏精確。本發明的試劑盒使用FAM和VIC雙通道可對STAT3 mRNA的表達進行準確的定量分析，具有快速、簡便、靈敏度高等檢測優點。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的引物、探針和試劑盒。

背景技術

手足口病是由腸道病毒感染引起的，以發熱和手、足、口腔、臀部等部位出現皮疹、皰疹或皰疹性咽峽炎為主要特征的一種常見于小兒的急性傳染病。自2008年安徽省阜陽市出現手足口病暴發疫情以來，發病率呈現逐年上升，目前發病率位居于我國法定報告傳染病的首位。手足口病已成為我國亟需解決的重大公共衛生問題。目前對重癥HFMD仍沒有好的標志物，輕癥與重癥臨床轉化的監測與治療仍然是一個難點，尋找早期識別標志物及有效的靶向治療手段，是降低該病死亡率的關鍵。信號傳導與轉錄激活因子（STATs）為一類雙功能分子，分子量為84～113kD之間，是一個可與靶基因調控區DNA結合胞質蛋白家族，其可與酪氨酸磷酸化信號偶聯，既參與信號傳導，又激活基因轉錄，從而發揮轉錄調控作用。我們研究發現重癥手足口病樣本中STAT3蛋白表達明顯上調，可以作為重癥手足口病早期識別診斷的分子標志物，本發明將熒光定量PCR技術方法，在mRNA水平檢測STAT3蛋白表達情況，為重癥手足口病的早期診斷提供了準確、快速、高效、敏感的檢測方法。

發明內容

為了克服現有技術中存在的缺點和不足，本發明的目的在于提供一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR引物，該引物特異性好，檢測靈敏精確。

本發明的另一個目的在于提供一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR探針，該探針特異性好，檢測靈敏精確。

本發明的還一個目的在于提供一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，該試劑盒使用FAM和VIC雙通道實時定量檢測STAT3 mRNA含量，準確性好，靈敏度高。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR引物，所述引物包括用于擴增STAT3基因的引物F1和引物R1、以及用于擴增對照基因GADPH的引物F2和引物R2，所述4條引物的核苷酸序列分別為：

F1：5’-TGTGACACCAACGACCTGC-3'

R1：5’-CCAAACTGCATCAATGAATCTA-3'

F2：5’-CCTGCCAAGTATGATGACATCAAGA-3'

R2：5’-GTAGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3'。

本發明的另一個目的通過下述技術方案實現：一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR探針，所述探針包括用于檢測STAT3基因的探針P1和用于檢測對照基因GAPDH的探針P2，所述探針的核苷酸序列分別為：

P1：5’-ACCATTGACCTGCCGATGTCCC-3'

P2：5’-TGGTGAAGCAGGCGGCCGAG-3'；

其中，所述探針P1和探針P2的5’端均標記熒光基團，3’端均標記淬滅基團。

優選的，所述探針P1的5’端標記熒光基團FAM，3’端標記淬滅基團TAMRA。

優選的，所述探針P2的5’端標記熒光基團VIC，3’端標記淬滅基團TAMRA。