[發明專利]一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的引物、探針和試劑盒

在審

• 申請號: 201910256460.3
• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN110205369A
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發明（設計）人: 鐘柏茂;陸小梅;袁旭;彭琪;黎四平;李文瑞
• 申請（專利權）人: 東莞市第八人民醫院（東莞市兒童醫院）;東莞市兒科研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 盧春華

1.一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR引物，其特征在于：所述引物包括用于擴增STAT3基因的引物F1和引物R1、以及用于擴增對照基因GADPH的引物F2和引物R2，所述4條引物的核苷酸序列分別為：

F1：5’-TGTGACACCAACGACCTGC-3'

R1：5’-CCAAACTGCATCAATGAATCTA-3'

F2：5’-CCTGCCAAGTATGATGACATCAAGA-3'

R2：5’-GTAGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3'。

2.一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR探針，其特征在于：所述探針包括用于檢測STAT3基因的探針P1和用于檢測對照基因GAPDH的探針P2，所述探針的核苷酸序列分別為：

P1：5’-ACCATTGACCTGCCGATGTCCC-3'

P2：5’-TGGTGAAGCAGGCGGCCGAG-3'；

其中，所述探針P1和探針P2的5’端均標記熒光基團，3’端均標記淬滅基團。

3.根據權利要求2所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR探針，其特征在于：所述探針P1的5’端標記熒光基團FAM，3’端標記淬滅基團TAMRA。

4.根據權利要求2所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR探針，其特征在于：所述探針P2的5’端標記熒光基團VIC，3’端標記淬滅基團TAMRA。

5.一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1所述的引物和權利要求2-4任一項所述的探針。

6.根據權利要求5所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒由2×NASBA反應液、5×NASBA反應酶混合液、標準品、陽性質控品及陰性質控品組成。

7.根據權利要求6所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，其特征在于：所述2×RT-PCR反應液包括如下具體成分：50mM Tris-HCl（pH8.3）、100mM KCl、10mMMgCl₂、1.0% Triton X-100、0.5mM dNTP、引物F1和引物R1各2.5μmol/L、引物F2和引物R2各2μmol/L、P1探針0.5μmol/L和P2探針0.4μmol/L。

8.根據權利要求6所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，其特征在于：所述5×RT-PCR反應酶混合液包括4U/mL Taq酶、1.6U/μL MMLV反轉錄酶、3U/μL RNA酶抑制劑和30mg/mL BSA。

9.根據權利要求6所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，其特征在于：所述標準品為含有標準品序列的重組pUC57質粒，所述標準品序列為：

GCGCTGCCCCATACCTGAAGACCAAGTTTATCTGTGTGACACCAACGACCTGCAGCAATACCATTGACCTGCCGATGTCCCCCCGCACTTTAGATTCATTGATGCAGTTTGGAAATAAKGGTGAAGGTGCTGAACCCTCAGCAGGAGGGCAGTTTG。

10.根據權利要求6所述的一種用于定量檢測STAT3 mRNA水平的PCR試劑盒，其特征在于：所述陽性質控品為含有STAT3 mRNA的細胞裂解液樣品，陰性質控品為無RNA酶的DEPC-H₂O。