[發明專利]一種均相化學發光法檢測促甲狀腺激素的試劑盒

在審

• 申請號: 201910254835.2
• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN109884325A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 成舜
• 申請（專利權）人: 常州普林森科技有限公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/58;G01N33/532;G01N21/76
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種能夠同時檢測促甲狀腺激素（TSH）濃度的試劑盒，所述方案通過如下步驟實現：（1）TSH抗體制備；（2）吖啶衍生物標記TSH抗體；（3）Fermin標記TSH抗體（4）夾心法檢測。本發明芯片用于檢測病人的血液中促甲狀腺激素（TSH）濃度的濃度，本方法形成的試劑盒反應步驟簡單，檢測快速，設備簡易化，實現化學發光POCT檢測，結果精準，延續化學發光平臺的優勢，靈敏度高，線性范圍寬，穩定性好。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種均相化學發光法檢測促甲狀腺激素(TSH)的試劑盒。

背景技術

促甲狀腺激素(thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH)是腺垂體分泌的促進甲狀腺的生長和機能的激素。人類的TSH為一種糖蛋白，含211個氨基酸，糖類約占整個分子的15％。整個分子由兩條肽鏈——α鏈和β鏈組成。TSH全面促進甲狀腺的機能，稍早出現的是促進甲狀腺激素的釋放，稍晚出的為促進T4、T3的合成，包括加強碘泵活性，增強過氧化物酶活性，促進甲狀腺球蛋白合成及酪氨酸碘化等各個環節。TSH促進甲狀腺上皮細胞的代謝及胞內核酸和蛋白質合成，使細胞呈高柱狀增生，從而使腺體增大。腺垂體分泌TSH，一方面受下丘腦分泌的促甲狀腺激素釋放激素(TRH)的促進性影響，另方面又受到T3、T4反饋性的抑制性影響，二者互相拮抗，它們組成下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸。正常情況下，下丘腦分泌的TRH量，決定腺垂體甲狀腺軸反饋調節的水平。TRH分泌多，則血中T3、T4水平的調定點高，當血中T3、T4超過此調定水平時，則反饋性抑制腺垂體分泌TSH，并降低腺垂體對TRH的敏感性，從而使血中T3，T4水平保持相對恒定。驟冷等外界刺激經中樞神經系統促進下丘腦釋放TRH，再經腺垂體甲狀腺軸，提高血中T3、T4水平。TSH分泌有晝夜節律性，清晨2～4時最高，以后漸降，至下午6～8時最低。

化學發光法是目前最先進的免疫檢測方法學，按標記物不同分為直接化學發光法、酶促化學發光法和電化學發光法；按是否存在分離清洗步驟，分為異相化學發光法和均相化學發光法。目前，在人醫體外診斷檢測方面，國內外使用直接化學發光法和酶促化學發光法的檢測產品較多，都屬于異相化學發光法。國外廠家包括雅培、西門子、索林、貝克曼和希斯美康等，國內廠家包括新產業、安圖、邁克、邁瑞、澤成、長光華醫等。各廠家儀器平臺大同小異，尤其是國內廠家，儀器結構復雜、故障率較高，質量參差不齊，影響了客戶對產品的信任。同時，國內廠家在試劑品種上未進行大膽的創新，只是重復別人有的品種，使用的原料(抗原抗體)同一來源，導致同質化嚴重，市場競爭激烈。現階段僅有西門子一家使用純態氧介導的均相化學發光法(光激化學發光法)產品上市，檢測需要特殊的LOCI模塊。LOCI技術是一步式化學發光夾心免疫檢測方法，試劑中含有兩種合成珠試劑和一種生物素化學的單克隆抗體。第一種珠試劑(敏感珠)包被有鏈霉親和素，并含有光敏感染料；第二種珠試劑(化學珠)包被另一種抗體，并含有化學發光染料；樣本和化學珠及生物素化抗體進行孵育后形成夾心復合物；然后加入敏感珠，與生物素結合后形成聚集的免疫復合物；復合物在680nm光照射下其中的敏感珠會產生單線態氧，單線態氧彌散到化學珠后可引發化學發光反應，在612nm波長下測量反應所產生的化學發光信號。該方法需要激發光，對設備要求高，標記材料特殊，不易獲取。

Lumigen公司發明了一種均相化學發光法，使用化學發光標記物標記抗原或抗體，同時辣根過氧化物酶(HRP)標記另一株抗原或抗體，一起去檢測樣本中的分析物，在純液相條件下直接注入激發物質產生化學發光，達到定量檢測目的。該方法不僅保證了化學發光法檢測性能的優勢，同時對檢測設備要求降低，設備小型化、簡易化。我們將辣根過氧化物酶(HRP)標記改為氯化血紅素(hemin,HRP的輔基)標記，使得標記方法和體系更加簡單化，避免了不同HRP帶來的批間差。

發明內容