[發明專利]高產克拉維酸的棒狀鏈霉菌菌株、其脅迫選育方法及其用途

在審

• 申請號: 201910253775.2
• 申請日: 2019-03-30
• 公開（公告）號: CN109913392A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 周汝德;董慶茹;李振森;吳桂蘋
• 申請（專利權）人: 山東睿智醫藥科技有限公司;山東潤澤制藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C12P17/18;C12R1/465;C12R1/22
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

1.一種高產克拉維酸的棒狀鏈霉菌菌株，該菌株已保藏于中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC No.：2019110，其保藏時間為：2019年2月25日。

2.如權利要求1所述棒狀鏈霉菌菌株的脅迫選育方法，其特征在于：在棒狀鏈霉菌分離培養基中加入青霉素和克雷伯氏菌進行脅迫選育。

3.如權利要求2所述棒狀鏈霉菌菌株的脅迫選育方法，其特征在于，包括步驟：

1）菌種活化

冷凍的棒狀鏈霉菌菌液解凍后，滴入棒狀鏈霉菌分離培養基斜面，劃線培養；25~30℃培養4~10天；

2）菌種冷凍保存

步驟1）活化培養后，在斜面中加入甘油保存液，然后轉移到凍存管中，-20℃下冷凍保存；

3）菌液稀釋

取出凍存管，解凍后取菌液，將菌液用生理鹽水稀釋10^-4~10^-7倍，菌液稀釋后涂棒狀鏈霉菌分離培養基平板，22~28℃培養6~10天；

4）脅迫培養

配制棒狀鏈霉菌分離培養基，加入青霉素和克雷伯氏菌并混合均勻，將其均勻平鋪到步驟3）的平板上，并確保單菌落被覆蓋，22~28℃培養10~15天；

5）挑取抑菌圈直徑大的菌種，接種到棒狀鏈霉菌分離培養基斜面上，22~28℃培養9~14天，取菌體加甘油保存液，轉移到凍存管中，-80℃下冷凍保存。

4.如權利要求3所述棒狀鏈霉菌菌株的脅迫選育方法，其特征在于，步驟1）、步驟3）、步驟4）、步驟5）中所述的棒狀鏈霉菌分離培養基為：酵母粉0.4%、葡萄糖0.4%、麥芽粉1%、瓊脂粉2.0%、PH調制8.2。

5.如權利要求3所述棒狀鏈霉菌菌株的脅迫選育方法，其特征在于：步驟4）中，青霉素的添加量為10mg~20mg/mL棒狀鏈霉菌分離培養基；克雷伯氏菌的添加量為0.5~2mL/mL棒狀鏈霉菌分離培養基。

6.如權利要求5所述棒狀鏈霉菌菌株的脅迫選育方法，其特征在于：克雷伯氏菌菌液的OD600為0.05~0.15。

7.權利要求1所述棒狀鏈霉菌菌株在提高克拉維酸產量的上用途。

8.權利要求7所述棒狀鏈霉菌菌株在提高克拉維酸產量的上用途，其特征在于：將所述棒狀鏈霉菌菌株接種至發酵培養基，22~28℃下搖床培養80~120小時。

9.權利要求8所述棒狀鏈霉菌菌株在提高克拉維酸產量的上用途，其特征在于，所述發酵培養基為：大豆蛋白 5.2%、糊精 0.96%、MOPS 1.05%、甘油 1.5%、KH₂PO₄ 0.12%、CaCl₂ 0.01%、FeCl₃ 0.003%、ZnSO₄·7H₂O 0.0005%、MgSO₄ 0.0005%、CuCl₂ 0.0005%、豆油 2.2%、PH調制7.0。