[發明專利]一種檢測醬油中4-甲基咪唑的方法

在審

• 申請號: 201910249044.0
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN109856288A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 李占彬;宋光林;趙麗君;申鷹;馬凱;楊昌彪;孫海達;張穎
• 申請（專利權）人: 貴州省分析測試研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 亳州速誠知識產權代理事務所(普通合伙) 34157
• 代理人: 劉佳

本發明屬于醬油添加劑的檢測領域，具體是一種檢測醬油中4?甲基咪唑的方法。包括以下步驟：1）樣品提取，2）scx柱子固相萃取，3）制備標準溶液，4）液相色譜條件，5）質譜檢測器進行檢測。本發明具有檢出限低、前處理便捷、穩定性好的優點，適用于醬油行業和醬油添加焦糖色素生產企業對醬油中4?甲基咪唑的分析檢測，而且檢測結果受主觀判斷因素影響小，易于推廣應用。

技術領域

本發明屬于醬油添加劑的檢測領域，具體是一種檢測醬油中4-甲基咪唑的方法。

背景技術

焦糖色素是一種在食品工業中應用范圍十分廣泛的天然著色劑，是食品添加劑的重要一員。由于焦糖色素能使醬油變成棕褐色，而被廣泛應用，目前焦糖色素已經發展成為全球范圍內用量最大的色素。

當前國內外大部分廠家生產的焦糖色素普遍采用氨法在高壓高溫下生產而成，在此種方法生產焦糖色素的過程中不可避免地產生一定量的4-甲基咪唑。4-甲基咪唑（簡稱4-MI）是一種重要的有機中間體，主要用于合成大宗胃藥西咪替丁，也可用作環氧樹脂固化劑和金屬表面防護劑等。醬油中的4-甲基咪唑是在以亞硫酸銨為原料生產焦糖色素時產生的。4-甲基咪唑是白色結晶粉末，溶于水和乙醇，有腐蝕性，4-甲基咪唑能導致動物長腫瘤，有可能給人體帶來致癌風險。出于4-甲基咪唑對人體潛在的危險性考慮，聯合國糧農組織（FAO），世界衛生組織（WHO），國際食品添加劑聯合專家委員會（JECFA）均確認焦糖色素是安全的，但對4-甲基咪唑做了限量的規定，標準是每天每公斤體重不超過200毫克。我國的國家標準GB1886.64-2015《食品安全國家標準食品添加劑：焦糖色》規定，焦糖色素中4-甲基咪唑的含量不得超過200mg/kg。因此，為保障醬油的安全性，對醬油中的4-甲基咪唑進行檢測分析具有重要意義。

目前，國內外檢測4-甲基咪唑的方法主要有薄層層析法、液相色譜法、氣相色譜法、離子色譜法、分光光度法等。硅膠薄層層析法，其操作步驟多，定量不準確，檢測限高，靈敏度低；氣相色譜法需要樣品量大，操作復雜；液相色譜法、分光光度法，實際樣品基質干擾嚴重，測定結果偏差較大。不適于對含有的微量4-甲基咪唑進行檢測。因此研究檢出限低、前處理便捷、穩定性好的分析方法對提升醬油、飲料等產品質量安全具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測醬油中4-甲基咪唑的方法，為醬油生產企業的產品質量安全提供技術保障，該方法具有檢出限低、前處理便捷、穩定性好等優點，而且檢測結果受主觀判斷因素影響小，易于推廣應用。

本發明的技術方案為：一種檢測醬油中4-甲基咪唑的方法，包括以下步驟：

1）樣品提取

稱取醬油樣品1g，置于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，取0.5mL上述樣品溶液，先加入8mL水，再加入0.5mL鹽酸溶液，混勻后待固相萃取凈化，得分析樣品；

2）scx柱子固相萃取

依次加入2ml甲醇及2ml純凈水進行活化scx柱子，控制流速<0.5 mL/min，抽干，取步驟1）中提取好的樣品用活化好的柱子進行固相萃取，上樣后依次加入2 mL水和2mL甲醇進行淋洗，控制流速<1.0 mL/min，抽干，再用4mL濃度為5%的氨化甲醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，控制流速<0.5 mL/min，抽干，將收集洗脫液在<50℃條件下，氮氣吹干，殘渣用1 mL 濃度為0.1%甲酸水溶液定容，渦旋混合1 min，過0.22 μm水系微孔濾膜，濾液供LC-MS/MS測定，做空白對照實驗；

3）制備標準溶液

分別吸取一定體積的標準使用液于5.0mL容量瓶中，配制成4-甲基咪唑濃度為20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL；

4）液相色譜條件