[發明專利]一種聚羥基脂肪酸酯的體外合成方法有效
| 申請號： | 201910248555.0 | 申請日： | 2019-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN109913510B | 公開（公告）日： | 2021-04-13 |
| 發明（設計）人： | 韓雪容;徐飛宏 | 申請（專利權）人： | 長春理工大學 |
| 主分類號： | C12P7/62 | 分類號： | C12P7/62 |
| 代理公司： | 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210 | 代理人： | 解瑩明 |
| 地址： | 130000 *** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 羥基 脂肪酸 體外 合成 方法 | ||
1.一種體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，所述聚羥基脂肪酸酯是在微生物體外合成的；
將ACS合成酶、PCT合成酶以及ReC合成酶加入水相合成體系中與聚合底物溶液混合，于28-31℃下靜置反應60～84h合成PHA；
其中，所述水相合成體系中聚合底物為(R)-3-羥基丁酸與(R)-2-羥基丁酸。
2.根據權利要求1所述的體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，合成共聚酯中，(R)-2-羥基丁酸摻入比例為0～33mol％。
3.根據權利要求1所述的體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，所述水相合成體系中，ACS合成酶濃度為0.2mg/mL、PCT合成酶濃度為0.2mg/mL、ReC合成酶濃度為0.5mg/mL。
4.根據權利要求1所述的體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，所述水相合成體系包括100mM磷酸二氫鈉、10mM氯化鎂、30mM ATP、0.2mg/ml小牛血清白蛋白、1mMCoA、10mM乙酸、200mM 3-羥基丁酸與2-羥基丁酸的混合物。
5.根據權利要求3所述的體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，ACS合成酶的制備包括如下步驟：
將含有acs基因的重組載體pCold-acs通過熱轉化至大腸桿菌BL21(DE3)構建重組表達菌株，經誘導表達及純化后得到ACS合成酶。
6.根據權利要求3所述的體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，PCT合成酶的制備包括如下步驟：
將含有pct基因的重組載體pQE-pct通過熱轉化至大腸桿菌BL21(DE3)構建重組表達菌株，經誘導表達及純化后得到PCT合成酶。
7.根據權利要求3所述的體外合成聚羥基脂肪酸酯的方法，其特征在于，ReC合成酶的制備包括如下步驟：
將含有phaC基因的重組載體pCold-phaC通過熱轉化大腸桿菌BL21(DE3)構建重組表達菌株，經誘導表達及純化后得到ReC合成酶。
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