[發(fā)明專利]一種針對(duì)EGFR L858R基因突變的特異性T細(xì)胞受體及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910247124.2
• 申請(qǐng)日: 2019-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN111748026A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜學(xué)明;李鳳娥;霍沖;鄧麗剛;鄒慶薇;王亞玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津亨佳生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/725
• 分類號(hào): C07K14/725;C12N15/12;C12N15/867;C12N5/10;A61K38/17;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 天津市君硯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12239
• 代理人: 張東浩

本發(fā)明提供一種針對(duì)EGFR L858R基因突變的特異性TCR及其應(yīng)用，所述TCR具有結(jié)合衍生自EGFR L858R基因突變的新抗原肽KITDFGRAK?HLA?A*1101復(fù)合物的特性，所述TCR包含α鏈和β鏈的可變區(qū)和恒定區(qū)。經(jīng)過該類TCR修飾的T細(xì)胞具有對(duì)EGFR L858R基因突變的HLA?A*1101腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷作用。另外，本發(fā)明還提供了用于治療涉及表達(dá)所述基因突變的腫瘤的藥物組合，具有特異性強(qiáng)，個(gè)體化治療效果好的特點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程及腫瘤免疫治療領(lǐng)域，具體涉及一種針對(duì)EGFR L858R基因突變的特異性T細(xì)胞受體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤免疫治療是通過重新啟動(dòng)并維持腫瘤-免疫循環(huán)，恢復(fù)機(jī)體正常的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而控制與清除腫瘤的一種治療方法。TCR（T cell receptor）療法即T細(xì)胞受體療法，在該療法中，分離出內(nèi)源的T細(xì)胞，加以工程化改造，并輸注回人體。這樣一來，帶有靶向癌細(xì)胞能力的T細(xì)胞數(shù)量將大增。這種方法除了能像細(xì)胞毒性化療和靶向治療快速殺滅腫瘤外，還避免了疫苗和免疫檢查點(diǎn)抑制劑療法的延遲效應(yīng)。TCR-T是繼腫瘤手術(shù)、放療、化療、靶向治療之后的最有發(fā)展前景的腫瘤治療技術(shù)之一，無論是國際還是國內(nèi)都是目前腫瘤免疫治療的研究熱點(diǎn)。

T細(xì)胞受體（簡稱TCR）是所有T 細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志，具有識(shí)別抗原呈遞細(xì)胞（APC）上人類主要組織相容性復(fù)合體（MHC）分子-抗原肽復(fù)合體的能力。TCR 是由α、β 兩條肽鏈構(gòu)成的異二聚體，每條肽鏈分為可變區(qū)（V區(qū)）、恒定區(qū)（C區(qū)）、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)等幾部分；其胞質(zhì)區(qū)很短，信號(hào)傳遞主要通過與其以非共價(jià)鍵結(jié)合的CD3 分子進(jìn)行。TCR 分子屬于免疫球蛋白超家族，其抗原特異性存在于V 區(qū)；V 區(qū)又各有三個(gè)高變區(qū)CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3 變異最大，直接決定了TCR 的抗原結(jié)合特異性。在TCR 識(shí)別MHC-抗原肽復(fù)合體時(shí)，CDR3可直接與抗原肽相結(jié)合。

TCR在識(shí)別APC或者靶細(xì)胞上的MHC分子所提呈的抗原肽時(shí)，既要識(shí)別抗原肽，同時(shí)也要識(shí)別自身MHC分子的多態(tài)性部分，此現(xiàn)象即MHC限制性。T細(xì)胞通過特異性T細(xì)胞受體識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面抗原肽-MHC復(fù)合體而被激活，活化后的T細(xì)胞可以直接溶解腫瘤細(xì)胞，或通過分泌細(xì)胞因子如干擾素、腫瘤壞死因子等抑制腫瘤生長。CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性MHC-I類分子限制細(xì)胞免疫功能，在抗腫瘤免疫中尤其重要。

HLA（human lymphocyte antigen，人類淋巴細(xì)胞抗原），受控于MHC的基因簇，是具有高度多態(tài)性的同種異體抗原，是目前所知人體最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，有幾十個(gè)基因座位，每個(gè)基因座位又有幾十個(gè)等位基因，且呈共顯性表達(dá)。HLA有A、B、C、D和DR 5個(gè)位點(diǎn)，分別稱為HLA-A，HLA-B，HLA-C，HLA-D和HLA-DR。

EGFR（epidermal growth factor receptor family）人類表皮生長因子受體家族屬于酪氨酸激酶受體家族，也被稱作HER家族或erbB家族。EGFR信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞的生長、增殖和分化等生理過程發(fā)揮重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵因子的活性或細(xì)胞定位異常，均會(huì)引起腫瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的發(fā)生。EGFR誘導(dǎo)癌癥至少通過3種機(jī)制：EGFR配體的過表達(dá)、EGFR的擴(kuò)增或EGFR的突變活化，其中以EGFR的突變活化為主要機(jī)制。EGFR基因是由28個(gè)外顯子組成，其中外顯子18-21是常見的基因突變位點(diǎn)，也是與易瑞沙等EGFR-TKI結(jié)合的位點(diǎn)。通常來說，EGFR的外顯子19缺失和外顯子21的L858R兩個(gè)突變對(duì)于易瑞沙靶點(diǎn)是敏感的。因此EGFR的外顯子19缺失和外顯子21的L858R突變可以作為腫瘤患者是否適用EGFR-TKI的一個(gè)重要的判斷標(biāo)準(zhǔn)，其中L858R基因突變，也就是EGFR蛋白的第858個(gè)氨基酸從L(亮氨酸)突變成了R(精氨酸)。