[發明專利]L-草銨膦的制備方法

在審

• 申請號: 201910247068.2
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN111748589A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 胡磊;曾超;奚超群
• 申請（專利權）人: 武漢茵茂特生物技術有限公司
• 主分類號: C12P9/00
• 分類號: C12P9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.式I化合物的制備方法，其特征在于，由式V化合物反應得到，反應式如下：

其中，R₁選自烴基、芳基、雜芳基、取代烴基、取代芳基、取代雜芳基；

R₂選自氨基或-OR₀；R₀選自烴基、硅烷基、芐基、烷基甲基、烷基取代烷氧基、3-8元脂環族基、芳基、雜芳基、取代芳基、取代雜芳基、Ar(CH₂)_nO-基團中的一種，Ar代表芳基、雜芳基，n取1-6。

2.一種L-草銨膦的制備方法，其特征在于，由式IV化合物反應制備式II化合物，反應式如下，脫保護基，即得到L-草銨膦，

其中，R₃選自氫、烷基、硅烷基、硅醚保護基、芐醚保護基、烷氧基甲基、烷氧基取代甲基、C2-C10直鏈或支鏈烯烷基、C2-C10直鏈或支鏈炔烷基、3-8元脂環族基團、芳基、雜芳基、氨基、取代氨基、Ar(CH₂)_a-基團中的一種，Ar代表芳基、雜芳基，a取1-6。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，式V化合物在酶E1和酶E2的作用下反應制備得到式I化合物，反應式如下：

所述E1為能夠將式V化合物水解為式I化合物的酶；

所述E2為能夠將式VI化合物消旋的酶；

反應過程中需添加輔酶。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，L-草銨膦的制備方法，包括式IV化合物在酶E1和酶E2的作用下反應制備得到式II化合物，反應式如下，脫保護基即得到L-草銨膦，

5.根據權利要求2所述的L-草銨膦的制備方法，其特征在于，R3為氫，R2為乙基或丙基或異丙基，控制反應體系的pH為5-8.5，所述輔酶為磷酸吡哆醛。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述酶E1基因來源包括Streptomycesramulosus、Pseudomonas azotoformans、Mycobacterium tuberculosis、豬肝、Candidaantartica、Pseudomonas wadenswilerensis、Pseudomonas sp、Brevundimonas diminuta。

7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述酶E2基因來源包括Bacillaceae、Trypanosoma cruzi、Oenococcus oeni、Amycolatopsis orientalis、Streptomyceslavendulae、Arthrobacter nicotianae、Ochrobactrum anthropi、Achromobacter obae。

8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述酶E1和酶E2為基因工程菌全細胞、破碎酶液、凍干粉或固定化酶或固定化細胞。

9.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述酶E1為氨基酸序列為SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、或SEQ ID NO：9所示的蛋白質，或者是SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、或SEQ ID NO：9經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加后具有將式V化合物水解為式I化合物活性的蛋白質，或者是SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、或SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列具有80％以上同源性具有將式V化合物水解為式I化合物活性的蛋白質。

10.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述酶E2為氨基酸序列為SEQ IDNO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10所示的蛋白質，或者是SEQID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加后具有將式VI化合物消旋活性的蛋白質，或與SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列具有80％以上同源性且具有將式VI化合物消旋活性的蛋白質。