[發明專利]檢測甲藻細胞凋亡的方法

有效

• 申請號: 201910246905.X
• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN110018143B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 陳輝蓉;吳梓涵;黎雙飛;胡章立;陳秀銳;李城彥
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 深圳市恒申知識產權事務所(普通合伙) 44312
• 代理人: 袁文英

1.一種檢測甲藻細胞凋亡的方法，其特征在于，包括如下步驟：

將待檢測甲藻液采用細胞凋亡誘導劑進行細胞凋亡誘導處理；

將經所述細胞凋亡誘導處理的所述甲藻液進行離心懸浮處理，獲得甲藻細胞濃縮液；

向所述甲藻細胞濃縮液中添加AnnexinV/FITC并進行孵育處理后，再繼續加入碘化丙啶進行染色處理，獲得染色甲藻細胞液；

采用成像流式細胞儀對所述染色甲藻細胞液中的甲藻細胞進行流式檢測，生成甲藻細胞的體積/縱橫比散點圖，根據所述體積/縱橫比散點圖選取縱橫比在0-0.6的甲藻細胞群體以獲取所需的甲藻細胞群體；

獲取葉綠素單熒光樣本數據生成單熒光樣本數據文件，在所述成像流式細胞儀的分析軟件中選擇補償窗口導入所述單熒光樣本數據文件后自動生成補償矩陣，調整標紅的矩陣數值，通過圖像驗證以后完成補償文件，在分析數據的時候導入所述補償文件實現對所述甲藻細胞群體做熒光補償，再生成AnnexinV/PI細胞散點圖；其中，在生成所述AnnexinV/PI細胞散點圖中，AnnexinV熒光為第二通道，PI熒光為第四通道，甲藻細胞所含葉綠素自發熒光在第五通道；

依據所述AnnexinV/PI散點圖得出所述待檢測甲藻液中的甲藻細胞凋亡細胞個數，依據所述甲藻細胞凋亡細胞個數計算出所述待檢測甲藻液中的甲藻細胞凋亡率。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：生成所述甲藻細胞的所述體積/縱橫比散點圖的方法包括如下步驟：

取所述染色甲藻細胞液并上機所述成像流式細胞儀，再將所述成像流式細胞儀的激光器功率調至功率上限，接著調試所述激光器功率逐步降低直至避免熒光飽和，然后生成所述體積/縱橫比散點圖。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：調試所述激光器功率逐步降低直至避免熒光飽和時的所述激光器功率為4-20 MV；

所述染色甲藻細胞液在所述成像流式細胞儀中進樣的流速為1μl/min-4μl/min。

4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：依據所述甲藻細胞凋亡細胞個數計算出所述待檢測甲藻液中的甲藻細胞凋亡率是按照如下公式計算：

所述甲藻細胞凋亡率%=C_X/C₀×100%;

式中的C_X為第x份待檢測甲藻液中的凋亡細胞個數；C₀為成像流式細胞儀所收集的第x份待檢測甲藻液中總的甲藻細胞個數。

5.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于：所述待檢測甲藻液中的甲藻為塔瑪亞歷山大藻。

6.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于：所述甲藻細胞濃縮液中的甲藻細胞濃度為10⁵-10⁶cells/ml；和/或

所述AnnexinV/FITC是按照每100μl所述甲藻細胞濃縮液加入1-5μl所述AnnexinV/FITC的比例添加至所述甲藻細胞濃縮液中，其中，所述甲藻細胞濃縮液中的甲藻細胞濃度為10⁵-10⁶cells/ml；和/或

所述碘化丙啶是按照每100μl所述甲藻細胞濃縮液加入0.1-0.5μg所述碘化丙啶的比例添加至所述甲藻細胞濃縮液中，其中，所述甲藻細胞濃縮液中的甲藻細胞濃度為10⁵-10⁶cells/ml。