[發明專利]一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物

有效

• 申請號: 201910246812.7
• 申請日: 2019-03-25
• 公開（公告）號: CN109758434B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 宋海星;羅曉明
• 申請（專利權）人: 成都醫學院
• 主分類號: A61K35/741
• 分類號: A61K35/741;A61K9/50;A61K47/36;A61P1/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明提供了一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物，它是用殼聚糖和海藻酸鈉交替包裹大腸桿菌Nissle 1917(EcN)，再由鈣離子交聯處于最外層的海藻酸鈉后得到；所述包裹的總層數為大于2的偶數。本發明能使得EcN抵抗胃酸、機械摩擦的同時，維持EcN的活性，發揮其在消化道內的抗炎功能。本發明克服了EcN易被胃內環境滅活的缺點，制備方法簡單，具有十分優良的應用價值。

技術領域

本發明涉及益生菌藥物領域，尤其涉及一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物。

背景技術

大腸桿菌Nissle 1917(EcN)是來源于人體內腸道中的一種益生菌，被廣泛用于預防傳染性腹瀉、炎癥性腸疾病以及防止新生兒消化道內病原菌定殖；其使用方式主要是口服。

在腸道疾病治療治療中，口服的EcN由于容易經受胃酸侵蝕以及消化道擠壓摩擦，其到達腸道病灶時的活性已被大大降低，發揮的治療作用十分局限。

海藻酸鈉和殼聚糖組成的保護性微膠囊目前已有報道，該微膠囊通常是由一層海藻酸鈉包裹細菌后，交聯鈣離子，再在外側包裹一層殼聚糖(E.coli Nissle microencapsμLation in alginate-chitosan nanoparticles and its effect on Campylobacterjejuni in vitro，Applied Microbiology and Biotechnology，2018)。然而，此種微膠囊包裹的EcN在pH值為2.5的環境中靜置1h后，僅千分之一的菌能存活下來；若將其置于pH更低、且含有胃蛋白酶的胃酸中，能存活下來的菌就會更少，對EcN的利用率極低。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種新的益生菌復合物。

本發明提供了一種治療炎癥性腸病的益生菌復合物，它是先后用殼聚糖和海藻酸鈉交替包裹大腸桿菌Nissle 1917，再由鈣離子交聯處于最外層的海藻酸鈉后得到；所述包裹的總層數為大于2的偶數。

如前述的益生菌復合物，所述包裹是將大腸桿菌懸液與殼聚糖或海藻酸鈉溶液混合，經孵育、靜置、富集菌體得到。

如前述的益生菌復合物，它是由如下方法制備得到：

(1)準備菌液：取16～24體積份的大腸桿菌Nissle 1917懸液，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(2)殼聚糖包裹：將菌液與0.4～0.6體積份的殼聚糖溶液混勻，得混合液；在搖床中孵育7min以上，靜置3min以上，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(3)海藻酸鈉包裹：將菌液與0.4～0.6體積份的海藻酸鈉溶液混勻，得混合液；在搖床中孵育7min以上，靜置3min以上，富集菌體，3～6體積份的PBS重懸；

(4)依次重復步驟(2)和(3)，重復次數為4次，得包裹菌體懸液；

(5)鈣離子交聯：將包裹菌體懸液與鈣鹽溶液混合，得混合液；靜置3min以上，富集菌體，即得；

步驟(2)所述殼聚糖溶液濃度為0.5～1.5mg/ml；優選的，為1mg/ml；

步驟(3)所述的海藻酸鈉溶液濃度為1.5～2.5mg/ml；優選的，為2mg/ml；

步驟(5)所述混合液中鈣離子終濃度為28～X mmol/L，其中X mmol/L為所述鈣鹽飽和溶液中鈣離子濃度；優選地，鈣離子終濃度為28.8mmol/L；

以上各步驟的搖床孵育溫度為25～39℃，搖床震蕩頻率為10～200rpm。

如前述的益生菌復合物，所述大腸桿菌Nissle 1917在包裹時處在對數生長期。